[發(fā)明專利]一種靶向肝癌細(xì)胞的pH/GSH雙響應(yīng)型納米藥物載體及其制備方法

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• 申請日: 2022-09-06
• 公開（公告）號: CN115721725A
• 公開（公告）日: 2023-03-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 曲劍波;張雪飛;隋新藝
• 申請（專利權(quán)）人: 中國石油大學(xué)（華東）
• 主分類號: A61K47/32
• 分類號: A61K47/32;A61K31/704;A61K9/52;A61P35/00;C08F265/06;C08F220/18;C08F222/38;C08F8/00
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1.一種靶向肝癌細(xì)胞的pH/GSH雙響應(yīng)型納米藥物載體及其制備方法，其特征在于步驟包括：

(1)以含半乳糖單體作為聚合單體，采用RAFT或ATRP反應(yīng)聚合制備線性聚合物，反應(yīng)溫度10-100℃；反應(yīng)時(shí)間為0.5-24h；單體濃度為0.1-10M。對于ATRP反應(yīng)，單體與引發(fā)劑的摩爾比范圍10:1-200:1，催化劑的加入量與引發(fā)劑相同，配體的加入量為催化劑的0.5-3倍；對于RAFT反應(yīng)，引發(fā)劑與RAFT試劑的摩爾比范圍為0.05-2.0之間。反應(yīng)溶劑可為甲苯、二甲苯、藜蘆醚、苯、溴苯、氯苯、二氧六環(huán)、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺等有機(jī)溶劑中的一種；反應(yīng)結(jié)束后，用四氫呋喃或者三氯甲烷稀釋反應(yīng)產(chǎn)物，對于ATRP反應(yīng)，需要將產(chǎn)物通過氧化鋁柱除去催化劑，得到的溶液在正己烷、環(huán)己烷或石油醚中沉淀兩次，離心后，所得高分子真空干燥后進(jìn)入步驟(2)；

(2)將步驟(1)得到的聚合物進(jìn)行酸解，利用強(qiáng)酸的水溶液，室溫下與聚合物混合攪拌0.5-24h，透析凍干后得到含半乳糖的親水聚合物；

(3)對于RAFT反應(yīng)，需將引發(fā)劑、12-冠醚-4、步驟(2)得到的聚合物和去離子水在反應(yīng)瓶中攪拌均勻得到水相；對于ATRP反應(yīng)，應(yīng)將配體、催化劑、12-冠醚-4、步驟(2)得到的聚合物和去離子水在反應(yīng)瓶中攪拌均勻得到水相；將(甲基)丙烯酸叔丁酯和含二硫鍵交聯(lián)劑混合均勻得到油相；將油相和水相混合后通氮?dú)獬?0min開始升溫聚合，反應(yīng)溫度為40-85℃，反應(yīng)時(shí)間1-48h，反應(yīng)結(jié)束后將所得的納米球溶液用透析袋透析24h，透析介質(zhì)依次為無水乙醇和去離子水，目的是除去未參加反應(yīng)的物質(zhì)，然后將透析袋里的納米球溶液用真空凍干機(jī)干燥，得到具有核殼結(jié)構(gòu)的聚(甲基)丙烯酸叔丁酯納米球凍干粉。

(4)將步驟(3)所得的產(chǎn)品加入到90％(體積比)的三氟乙酸水溶液中，室溫下反應(yīng)過夜脫除叔丁基保護(hù)，然后將反應(yīng)混合物在去離子水中透析24h，將透析袋里的納米球溶液用真空凍干機(jī)干燥，得到能夠靶向肝癌細(xì)胞的pH/GSH雙響應(yīng)型納米球干粉。

(5)將步驟(4)所得的納米球干粉分散在藥物的pH緩沖溶液中，藥物的濃度范圍10-2000μg/ml,pH緩沖液pH值范圍6-8。藥物分子通過靜電作用吸附到載體上，室溫下混合24h后通過離心分離得到載藥納米球。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靶向肝癌細(xì)胞的pH/GSH雙響應(yīng)型納米藥物載體及其制備方法，其特征在于，所述的含半乳糖單體為6-O-甲基丙烯酰基-雙丙酮-D-半乳糖、6-O-丙烯酰基-雙丙酮-D-半乳糖、6-O-甲代烯丙基-雙丙酮-D-半乳糖、對(雙丙酮-D-半乳糖-6-甲氧基)苯乙烯中的至少一種。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的靶向肝癌細(xì)胞的pH/GSH雙響應(yīng)型納米藥物載體及其制備方法，其特征在于，步驟(1)中所述的RAFT反應(yīng)體系中，RAFT試劑為4-氰基-4-(苯基硫代甲酰硫基)戊酸(CPADB)、2-氰基-2-丙基苯并二硫(CPDB)、4-氰基-4-(十二烷基三硫代碳酸酯基)戊酸(CDPT)、4-氰基-4-(丙基三硫代碳酸酯基)戊酸(CPPT)、二硫代苯甲酸枯酯(CDB)、2-(十二烷基三硫代碳酸酯基)-2-甲基丙酸(DMPA)等常見RAFT試劑的至少一種；引發(fā)劑為偶氮二異丁腈、偶氮二異庚腈、過氧化苯甲酰、過氧化苯甲酰叔丁酯、過氧化-2-乙基己酸叔丁酯、過氧化-2-乙基己酸叔戊酯、烷基過氧化氫、過氧化十二烷酰等常見油溶性引發(fā)劑的至少一種；反應(yīng)溫度50-80℃；反應(yīng)時(shí)間為1-20h；單體濃度1-5M。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的靶向肝癌細(xì)胞的pH/GSH雙響應(yīng)型納米藥物載體及其制備方法，其特征在于，步驟(1)中所述的ATRP反應(yīng)體系中，引發(fā)劑為2-溴異丁酸乙酯、2-溴丙酸甲酯、2-碘異丁酸乙酯、芐基氯或2-溴丙腈等常見ATRP反應(yīng)引發(fā)劑的至少一種；配體為N,N,N,N’,N’-五甲基二亞乙基三胺(PMDETA)，二聯(lián)吡啶(Bipy)、三[(2-二甲基氨基)乙基]胺(Me₆TREN)、三苯基膦或三丁基膦的至少一種；催化劑為還原態(tài)過渡金屬鹽；反應(yīng)溫度30-75℃；反應(yīng)時(shí)間為0.5-12h；單體濃度為1-5M。