[發明專利]一種γδT細胞功能化的磁性微球、制備方法及其用途

有效

• 申請號: 202211065090.3
• 申請日: 2022-09-01
• 公開（公告）號: CN115381965B
• 公開（公告）日: 2023-03-14
• 發明（設計）人: 陳祥;馬鐸
• 申請（專利權）人: 廣東齡值生物科技有限公司
• 主分類號: A61K47/69
• 分類號: A61K47/69;A61K47/59;A61K35/17;A61K41/00;A61P1/16;A61P9/00;A61P25/00;A61P31/00;A61P35/00;A61P37/00
• 代理公司: 深圳天融專利代理事務所(普通合伙) 44628
• 代理人: 杜英

1.一種γδT細胞功能化的磁性微球的制備方法，其特征在于，磁性物質原位沉積在中空的多孔二氧化硅微球內部，微球表面經過聚多巴胺改性后，粘附γδT細胞，得到γδT細胞功能化的磁性微球。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1.二氧化硅微球的制備：將正硅酸烷基酯溶于有機溶劑中，加入含有致孔劑的水中，攪拌混合后，用SPG膜進行快速膜乳化，形成乳液，滴加氨水，加熱攪拌反應，過濾，洗滌，干燥，得到二氧化硅微球；

S2.磁性微球的制備：將步驟S1制得的二氧化硅微球分散在水中，加入氯化亞鐵溶解，攪拌混合均勻后，滴加氨水，加熱超聲使其充分反應，過濾，洗滌，干燥，得到磁性微球；

S3.聚多巴胺改性磁性微球的制備：將步驟S2制得的磁性微球分散在水中，加入多巴胺鹽酸鹽和催化劑溶液，加熱反應，過濾，洗滌，煅燒，得到聚多巴胺改性磁性微球；

S4.γδT細胞的分離和提?。簩⑷送庵苎鼓幚?，離心，取細胞沉淀，加入培養基中重懸，得到細胞懸液，將細胞懸液加入人淋巴細胞分離液中，離心，得到多層液體，取白膜層的單個核細胞再次加入培養基，經過多種細胞因子誘導增殖，混勻后離心，取細胞沉淀，生理鹽水洗滌，得到γδT細胞；

S5.γδT細胞功能化的磁性微球的制備：將步驟S4制得的γδT細胞和步驟S3制得的聚多巴胺改性磁性微球均加入生理鹽水中，攪拌混合反應，過濾，洗滌，得到γδT細胞功能化的磁性微球。

3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟S1中所述正硅酸烷基酯為正硅酸乙酯和/或正硅酸甲酯；所述有機溶劑為酯類有機溶劑，選自乙酸乙酯、乙酸甲酯、甲酸甲酯、甲酸乙酯、丙酸乙酯中的至少一種；所述SPG膜的孔隙為50-100μm；所述致孔劑選自聚乙二醇辛基苯基醚和聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯中的至少一種；所述氨水濃度為25-35wt％；所述正硅酸烷基酯、致孔劑、氨水的質量比為100：(2-5)：(12-15)；所述加熱溫度為50-70℃，時間為3-5h。

4.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟S2中所述氨水濃度為25-35wt％；所述二氧化硅微球、氯化亞鐵、氨水的質量比為100：(25-40)：(12-17)；所述加熱至溫度為60-90℃，超聲功率為1000-1500W，反應時間為1-2h。

5.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟S3中所述磁性微球、多巴胺鹽酸鹽和催化劑溶液的質量比為100：(30-45)：(2-5)；所述催化劑溶液為含有0.01-0.05mol/LCoCl₂，pH值為5.5-6的Tris-HCl溶液，所述加熱溫度為35-45℃，反應時間為2-4h；所述煅燒溫度為300-500℃，時間為1-3h。

6.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟S4中第一次所述離心轉速為3000-4000r/min，時間為10-20min；兩次所述的培養基均為含有1-3mM的谷氨酰胺的1640培養基；所述細胞懸液和人淋巴細胞分離液的質量比為(1-2)：1；所述細胞沉淀和培養基的質量比為1：(1-2)；所述單個核細胞和培養基的質量比為(1-3)：100。

7.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟S5中所述γδT細胞和聚多巴胺改性磁性微球的質量比為(1-3)：10；所述反應時間為1-2h。

8.一種如權利要求1-7任一項所述的制備方法制得的γδT細胞功能化的磁性微球。

9.一種如權利要求8所述γδT細胞功能化的磁性微球用于制備用于治療癌癥的藥物的用途，所述癌癥為肺癌、乳腺癌、前列腺癌、結腸癌、肝癌。