[發明專利]一種清淋顆粒HPLC特征圖譜構建方法

在審

• 申請號: 202211052059.6
• 申請日: 2022-08-31
• 公開（公告）號: CN115469028A
• 公開（公告）日: 2022-12-13
• 發明（設計）人: 展月;趙俞;鄢必新;郭文英;王鑫;祁樹賢;李敏;倫宗慧;秦思蓮
• 申請（專利權）人: 修正藥業集團股份有限公司;吉林修正藥業新藥開發有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/74;G01N30/86
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 王洋

1.一種清淋顆粒HPLC特征圖譜構建方法，包括：

A)將清淋顆粒采用溶劑溶解，得到待測液；

B)將待測液采用高效液相色譜法測定，得到清淋顆粒的HPLC特征圖譜；

所述高效液相色譜法色譜條件為：色譜柱為C18柱；流動相A為乙腈，流動相B為0.2％磷酸，梯度洗脫。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，還包括制備參照物溶液：分別取梔子苷、京尼平苷，采用甲醇溶解，得到參照物溶液；

將所述參照物溶液采用高效液相色譜法測定，得到參照物的色譜圖；并根據參照物的色譜圖對清淋顆粒HPLC特征圖譜的成分進行定性測定。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脫具體為：

0～10min，A相：5％、B相：95％；

10～15min，A相：5％～10％、B相：95％～90％；

15～45min，A相：10％～20％、B相：90％～80％；

45～50min，A相：20％～25％、B相：80％～75％；

50～60min，A相：25％～30％、B相：75％～70％。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述色譜柱為Agilent ZORBAX SB-C18，規格為5μm，4.6×250mm；柱溫30℃～40℃。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述流動相流速為0.9～1.1mL/min；檢測波長為235～245nm；進樣量為10～20μL；理論塔板數按芍藥苷峰計算應不低于3000。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述流動相流速為1.0mL/min；檢測波長為240nm；進樣量為10μL；

所述參照物溶液中，梔子苷的濃度為100μg/mL；京尼平苷的濃度為100μg/mL。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，采用中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統對清淋顆粒HPLC特征圖譜的相似度進行評價，得到由9個特征峰構成的清淋顆粒HPLC標準特征圖譜，其中第3號峰為梔子苷峰，第8號峰為京尼平苷峰；對9個特征峰進行歸屬：1、2、4號特征峰歸屬為炙甘草藥材，3、5號特征峰歸屬為梔子藥材，6、7號特征峰歸屬為大黃藥材，8、9號特征峰歸屬為鹽車前子藥材。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，在所述標準特征圖譜中，以梔子苷峰為參照峰S峰，計算各特征峰與S峰的相對保留時間，所述相對保留時間在規定值的±10％之內，所述規定值分別為：0.70-峰1、0.91-峰2、1.00-峰3、1.60-峰4、1.67-峰5、1.83-峰6、2.27-峰7、2.76-峰8、2.89-峰9。

9.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟A)所述溶劑為甲醇；所述溶解為超聲提取；所述超聲功率為400W，40kHz；所述超聲時間為20～40min。

10.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟A)所述清淋顆粒的質量g和溶劑的體積mL的比為(1～2)：(20～50)。