[發(fā)明專利]一種生物樣本中乳酸含量測定試劑盒及方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202211040653.3
• 申請日: 2022-08-29
• 公開（公告）號: CN115343238A
• 公開（公告）日: 2022-11-15
• 發(fā)明（設計）人: 馮任南;張銘珈;劉麗燕;趙金慧
• 申請（專利權(quán)）人: 哈爾濱醫(yī)科大學
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N1/38
• 代理公司: 徐州拉沃智佳知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 32455
• 代理人: 劉鵬

本發(fā)明公開了一種生物樣本中乳酸含量測定試劑盒及方法，該試劑盒包括由三羥甲基氨基甲烷?鹽酸溶液組成的溶劑、乳酸標準溶液、由煙酰胺腺嘌呤二核苷酸、氮四唑藍、吩嗪硫酸甲酯組成的試劑一、由乳酸脫氫酶組成的試劑二、由濃鹽酸組成的終止劑。本方法的原理為利用乳酸脫氫酶及顯色劑進行電子傳遞，產(chǎn)物在堿性條件下呈現(xiàn)紫紅色，利用酶標儀測定吸光度值，計算乳酸濃度。本方法樣本前處理過程簡單易行，試劑種類少，樣本用量少，節(jié)約成本。本方法可應用測定大量樣品，重復性好，準確度高，穩(wěn)定性好，適合于常規(guī)實驗室應用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于乳酸檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種生物樣本中乳酸含量測定試劑盒及方法。

背景技術(shù)

乳酸與糖、脂、蛋白質(zhì)代謝以及細胞內(nèi)的能量代謝有著密切關(guān)系。乳酸也是糖酵解通路的重要產(chǎn)物，乳酸還可經(jīng)過糖異生轉(zhuǎn)化為葡萄糖供給機體能量。由此可見乳酸是人體重要的代謝產(chǎn)物。血乳酸不僅可以作為組織含氧狀況的判斷指標，而且還可用于作為估計休克預后的一個重要指標。此外，乳酸還與多種疾病（代謝性疾病、腫瘤、肝病等）相關(guān)。因此，對生物樣本中乳酸含量進行測定分析，對監(jiān)測疾病的發(fā)生發(fā)展具有重要的意義。

測定乳酸的方法主要有三類：化學法、氣相色譜法和酶比色法。化學法所用試劑較簡單，但缺點是操作繁瑣、耗時較長，穩(wěn)定性差，易受干擾；氣相色譜法儀器價格昂貴，生物樣本前處理復雜繁瑣，故難以在臨床實驗室中廣泛應用。而酶比色法具有特異性好、抗干擾能力強、操作簡便、耗時少、經(jīng)濟和樣品用量少等優(yōu)點，便于實際應用。酶比色法主要包括乳酸脫氫酶法和乳酸氧化酶法。目前無論那種酶比色法，都存在著一定的弊端。例如乳酸脫氫酶法中涉及的反應試劑不穩(wěn)定，而乳酸氧化酶法涉及多種酶參與反應，反應試劑多，步驟繁瑣，不利于臨床大樣本量的測定。基于此，發(fā)明了一種簡單、快速、穩(wěn)定的酶比色法檢測生物樣本（血液、組織和細胞）中乳酸含量的方法。反應原理如下所示：

L-乳酸+煙酰胺腺嘌呤二核苷酸丙酮酸+還原性輔酶Ⅰ；

還原性輔酶Ⅰ+氮四唑藍煙酰胺腺嘌呤二核苷酸還原型硝基四氮唑藍（紫色）。

公開號為CN110426357A的專利文件中，公開了一種靈敏度高的乳酸檢測試劑，公開號為CN110343740A的專利文件中，公開了一種乳酸試劑盒及其制備方法和應用，公開號為CN109957603A的專利文件中，公開了一種靈敏度高的乳酸檢測試劑，以上三種方法都采用了多步酶反應的方法，反應步驟繁瑣，反應試劑中包含用了一些毒性物質(zhì)，如疊氮鈉，不利于環(huán)保。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術(shù)中的不足之處，本發(fā)明的目的在于提供一種生物樣本中乳酸含量測定試劑盒及方法，具有操作簡便，快捷有效，重復性好，準確度高等特點。

為了達到上述目的，本發(fā)明技術(shù)方案如下：

一種生物樣本中乳酸含量測定試劑盒，包括試劑一和試劑二，

試劑一：由煙酰胺腺嘌呤二核苷酸、氮四唑藍、吩嗪硫酸甲酯組成，粉劑×1瓶，-20℃保存；

試劑二：由乳酸脫氫酶組成，粉劑×1瓶，-20℃保存。

進一步的，所述試劑一中所含的煙酰胺腺嘌呤二核苷酸的質(zhì)量為23.7 mg，氮四唑藍的質(zhì)量為10.4 mg，吩嗪硫酸甲酯的質(zhì)量為3.56 mg。

進一步的，所述試劑二中所含的乳酸脫氫酶的質(zhì)量為15 mg。

進一步的，還包括溶劑，溶劑由三羥甲基氨基甲烷-鹽酸溶液組成，液體100mL×1瓶，4℃保存。

更進一步的，所述三羥甲基氨基甲烷-鹽酸溶液的pH值為8.8。

進一步的，還包括乳酸標準溶液，所述乳酸標準溶液的濃度為5.56 mmol/L，4℃保存。

進一步的，還包括終止劑，終止劑由鹽酸組成，液體50 mL×1瓶，室溫保存。

更進一步的，所述鹽酸的濃度為1.0 mol/L。