[發明專利]一種腺病毒重組狂犬病疫苗及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202211033272.2
• 申請日: 2022-08-26
• 公開（公告）號: CN115820738A
• 公開（公告）日: 2023-03-21
• 發明（設計）人: 李廣虎
• 申請（專利權）人: 李廣虎
• 主分類號: C12N15/861
• 分類號: C12N15/861;C12N15/47;C12N5/10;A61K39/205;A61P31/14
• 代理公司: 北京知聯天下知識產權代理事務所(普通合伙) 11594
• 代理人: 張迎新

本發明屬于疫苗制備領域，特別涉及一種腺病毒重組狂犬病疫苗及其制備方法和應用，所述腺病毒重組狂犬病疫苗包括重組狂犬病腺病毒載體病毒；重組狂犬病腺病毒載體病毒包括人5型腺病毒載體，以及連接在人5型腺病毒載體酶切位點之間的狂犬病毒糖蛋白抗原的編碼序列；其中，狂犬病毒糖蛋白抗原由狂犬病病毒ERA株糖蛋白序列的I和/或II和/或Ⅲ號抗原位氨基酸位點進行優化后得到。優化后的抗原產生的抗體滴度更高，與腺病毒進行重組后制成的腺病毒重組狂犬病疫苗可適用于多種作用途徑，降低和消除預存免疫對疫苗的影響，對狂犬病產生較強的保護作用，構建的疫苗在胞內表達佐劑，更利于激活免疫通路。

技術領域

本發明屬于疫苗制備領域，特別涉及一種腺病毒重組狂犬病疫苗及其制備方法和應用。

背景技術

狂犬病(rabies)是由狂犬病病毒(rabiesvirus，RABV)感染引起的一種高度致死性的人獸共患傳染病。RABV共編碼5個結構蛋白，分別是核蛋白(nucleoprotein，N)、磷蛋白(phosphoprotein，P)、基質蛋白(matrixprotein，M)、糖蛋白(glycoprotein，G)以及RNA依賴的RNA聚合酶大蛋白(L)，其中RABV糖蛋白(RABVGG)是病毒粒子表面唯一的蛋白，在RABV感染宿主后結合細胞表面的受體幫助入侵，同時也能夠刺激機體產生保護性中和抗體(virusGinducedneutralizingantibody，VNA)。

RABVGG上至少存在3個主要中和抗體結合位點：抗原位點Ⅰ～Ⅲ，此外，還有一些次要線性表位。糖蛋白的抗原位點I位于218～240位氨基酸區域，是一個次要線性中和表位，其最小結合區為KLCGVL(226～231位)，核心殘基為K-CGV-。Ⅱ號位點是由第34～42位和第198～200位氨基酸兩個位點通過二硫鍵C35-C207形成的一個保守性較高的空間表位，其中34～42位、147位、184位和198～200位氨基酸至關重要。Ⅲ號位點位于330～357位氨基酸，也是一個空間表位，其中333～338位氨基酸區段是中和抗體主要結合部位，位于342～343位的a表位是次要的中和位點，第330位、333位、336位及338位氨基酸是關鍵殘基。Ⅱ號和Ⅲ號抗原位點是主要病毒中和表位，兩位點在空間上十分接近，其中一些關鍵殘基突變可對病毒的毒力、宿主范圍或傳播速度產生影響。實驗發現，糖蛋白上260～267位(LHDFRSDE)為一線性中和表位，單獨或與T細胞表位聯用可在小鼠體內誘生抗狂犬抗體，有效抵抗病毒攻擊。

現有的狂犬病疫苗多為滅活疫苗和病毒載體疫苗。滅活疫苗具有非常高的安全性，但狂犬病傳統滅活疫苗免疫后效力較低，持續時間較短，需多次免疫，免疫程序相對繁瑣。痘病毒(vacciniavirus)在1982年就被開發成表達外源基因的載體，隨后開發了表達RABVGG的重組痘病毒載體疫苗(V-RG)，并作為野生動物口服活載體疫苗在北美洲使用多年，該重組病毒具有較好的熱穩定性，但免疫效果在部分野生動物中不是很理想。金絲雀痘病毒(canarypox)載體重組狂犬病疫苗(PUREVAX)可為貓提供長達3a的免疫保護，但是該載體僅少數實驗室在使用。腺病毒載體狂犬病疫苗ONRAB是基于人腺病毒5型(AdHu 5)載體開發的野生動物用口服狂犬病疫苗。公開號為CN103468743B的專利提出了一種狂犬病疫苗及其制備方法，該專利基于黑猩猩型腺病毒AdC68載體構建了一種新型狂犬病疫苗；公開號為CN108048483A的專利中提出了一種復制型重組腺病毒HAdV-5載體系統及其應用，采用復制型人5型腺病毒載體，免疫原性較好，但是由于復制型腺病毒載體因其載體的復制特征，在實際使用過程中存在生物安全風險；而抗原采用狂犬病病毒糖蛋白天然序列，即沒有對抗原糖蛋白氨基酸序列以及表達框進行優化，產生的抗體滴度相對較低。

發明內容

針對上述問題，本發明提出了一種一種腺病毒重組狂犬病疫苗，所述腺病毒重組狂犬病疫苗包括重組狂犬病腺病毒載體病毒；

所述重組狂犬病腺病毒載體病毒包括人5型腺病毒載體，以及連接在所述人5型腺病毒載體酶切位點之間的狂犬病毒糖蛋白抗原的編碼序列；