[發明專利]一種蜂蜜中硝基呋喃代謝物殘留的快速測定方法

在審

• 申請號: 202210986443.7
• 申請日: 2022-08-17
• 公開（公告）號: CN115452972A
• 公開（公告）日: 2022-12-09
• 發明（設計）人: 楊明;江小明;楊永;涂鳳琴;伊鋆;盧躍鵬
• 申請（專利權）人: 武漢食品化妝品檢驗所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/14;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 武漢科皓知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 42222
• 代理人: 彭育

1.一種蜂蜜中硝基呋喃代謝物殘留的快速測定方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)混合外標標準儲備液和混合外標工作液的配制：稱取硝基呋喃代謝物混合外標標準品，用乙腈溶解并定容成濃度為100μg/mL的外標標準儲備液，于-20℃避光保存；移取適量混合外標標準儲備液，用乙腈稀釋成濃度為100ng/mL的混合外標工作液；

2)混合內標工作液的配制：將100μg/mL的AOZ-D₄、AMOZ-D₅、SEM-¹³C¹⁵N₂、AHD-¹³C₃混合內標標準品溶解在10mL乙腈中，配制成濃度為10μg/mL的硝基呋喃代謝物的混合內標儲備液；移取適量混合內標儲備液，用乙腈稀釋成濃度為100ng/mL的混合內標工作液；

3)基質匹配工作液的配制：向不含待測物的蜂蜜樣品中添加適量混合外標工作液和混合內標工作液，經過前處理步驟，得到濃度分別為0.25ng/mL、0.5ng/mL、1.0ng/mL、2.0ng/mL、4.0ng/mL、10ng/mL、20ng/mL的系列基質匹配工作液；

4)樣品前處理、凈化：稱取蜂蜜，加入鄰硝基苯甲醛、鹽酸溶液，渦旋使其充分混勻，于超聲波清洗儀中衍生，衍生完全后再加入提取液，渦旋提取、離心，取全部上清液用200mgPSA+100mgC18進行QuEChERS凈化，渦旋提取、離心后經0.22μm聚四氟乙烯濾膜過濾，待分析；

5)樣品分析檢測：采用高效液相色譜-串聯譜法對系列基質匹配標準工作液進行測定，繪制標準曲線；以相同參數對步驟4)中上清液進行檢測，獲得試樣中硝基呋喃代謝物的質量色譜圖，以保留時間和離子比率對目標物進行定性分析，以內標法定量計算得到待測物的濃度；

其中，高效液相色譜-串聯譜法中流動相A為甲酸-乙酸銨的水溶液，水溶液中甲酸濃度為0.1％(v/v)，乙酸銨濃度為5mmol/L，流動相B為0.1％甲酸乙腈溶液；線性梯度洗脫中流動相A+流動相B＝100％，線性梯度洗脫條件為：0-2min，10.0％B；2-5.5min，10.0-90.0％B；5.5-8min，90.0％B；8-8.1min，90.0-10.0％；8.1-10min，10.0％B。

2.根據權利要求1所述的快速測定方法，其特征在于，步驟4)中樣品前處理、凈化方法為：稱取蜂蜜試樣4g，置于50mL離心管中，添加適量混合內標工作液，再添加0.2mL、0.1mol/L鄰硝基苯甲醛及5mL、0.2mol/L鹽酸，渦旋混合至完全溶解，在53Hz、60℃條件下水浴超聲波中衍生60min，用3.0mL、0.3mol/L K₃PO₄溶液調pH至7.0±0.2后添加8.0mL乙腈和4.0g氯化鈉，在劇烈旋轉10min后以3900rpm的轉速離心3min，取全部上清液于含有200mg PSA+100mg C18的10mL離心管中，旋轉混合物3min，再在3900rpm下離心3min后通過0.22μm聚四氟乙烯濾膜過濾，待分析。

3.根據權利要求1所述的快速測定方法，其特征在于，步驟5)中標準曲線繪制方法為：以高效液相色譜-串聯譜法對濃度分別為0.25ng/mL、0.5ng/mL、1.0ng/mL、2.0ng/mL、4.0ng/mL、10ng/mL、20ng/mL的系列基質匹配工作液進行檢測，獲得基質匹配工作液的質量色譜圖，以內、外標的峰面積比為縱坐標，以內、外標標準液的濃度比為橫坐標，繪制標準曲線，得到線性回歸方程。

4.根據權利要求1-3任一項所述的快速測定方法，其特征在于，質譜條件為：離子源為電噴霧離子源；檢測方式為多反應監測；掃描方式為正離子模式掃描；幕氣氣壓為10psi；離子源氣體為GS1、50psi；離子源氣體為GS2、50psi；離子噴射電壓為5500V；源溫度為500℃；碰撞氣體為氮氣。

5.根據權利要求1-3任一項所述的快速測定方法，其特征在于，色譜條件為：色譜柱為Waters XBridge C18柱；進樣體積為5μL；柱溫為40℃；流速為0.3mL/min。