[發(fā)明專利]一種同時(shí)檢測(cè)引起低色素性貧血STEAP3基因突變和eSNP的試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210984149.2
• 申請(qǐng)日: 2022-08-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN116064766A
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-05-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉頓;陳創(chuàng)奇;吳遠(yuǎn)菲;易升;方萍;董云巧;張曦倩;劉風(fēng)華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣東省婦幼保健院
• 主分類號(hào): C12Q1/6883
• 分類號(hào): C12Q1/6883;C12N15/11;C12Q1/686
• 代理公司: 廣州嘉權(quán)專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 44205
• 代理人: 姜磊

1.一種同時(shí)檢測(cè)引起低色素性貧血STEAP3基因突變和eSNP的引物組，其特征在于，包括引物對(duì)1-7；

所述引物對(duì)1的上下游引物核苷酸序列如SEQ?ID?NO:1-2所示；所述引物對(duì)2的上下游引物核苷酸序列如SEQ?ID?NO:3-4所示；所述引物對(duì)3的上下游引物核苷酸序列如SEQ?IDNO:5-6所示；所述引物對(duì)4的上下游引物核苷酸序列如SEQ?ID?NO:7-8所示；所述引物對(duì)5的上下游引物核苷酸序列如SEQ?ID?NO:9-10所示；所述引物對(duì)6的上下游引物核苷酸序列如SEQ?ID?NO:11-12所示；所述引物對(duì)7的上下游引物核苷酸序列如SEQ?ID?NO:13-14所示。

2.一種同時(shí)檢測(cè)引起低色素性貧血STEAP3基因突變和eSNP的試劑盒，其特征在于，包括權(quán)利要求1所述的引物組。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中還包括陰性質(zhì)控品、eSNP(rs6721852)質(zhì)控品、PCR緩沖液、dNTPs、DNA聚合酶、LC?Green染料、甜菜堿、去離子水、DMSO和石蠟油。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述DNA聚合酶為Taq?DNA聚合酶。

5.一種非診斷目的的同時(shí)檢測(cè)引起低色素性貧血STEAP3基因突變和eSNP的檢測(cè)方法，其特征在于，采用權(quán)利要求3-4中任一項(xiàng)所述的試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，包括以下步驟：

(1)采集外周血進(jìn)行DNA抽提，得到樣品DNA；

(2)以所述樣品DNA、陰性質(zhì)控品和eSNP(rs6721852)質(zhì)控品為模板DNA，分別加入PCR緩沖液、dNTPs、DNA聚合酶、LC?Green染料、甜菜堿、去離子水、DMSO、上下游引物對(duì)1、2、3、4、5、6或7，得到篩查STEAP3基因突變和eSNP分型的反應(yīng)體系；

(3)將所述反應(yīng)體系加入至96孔板中，采用石蠟油進(jìn)行液封后，進(jìn)行PCR擴(kuò)增；

(4)待PCR擴(kuò)增完成后，在高分辨率熔解曲線分析儀上進(jìn)行熒光檢測(cè)，得到HRM分析結(jié)果。

6.根據(jù)權(quán)利要求5的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(2)中反應(yīng)體系包括以下組分：PCR緩沖液2.0μL，2.5nM?dNTPs?1.0μL，5U/μL?Taq?DNA聚合酶0.4μL，10μM上下游引物1.2μL，1×LC?Green?2.0μL，模板DNA?1.5μL，5M甜菜堿4.0μL，DMSO?2.0μL，去離子水5.9μL。

7.根據(jù)權(quán)利要求5的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(3)中擴(kuò)增反應(yīng)的反應(yīng)程序?yàn)椋?5℃預(yù)變性5分鐘；95℃30秒，62℃30秒，72℃30秒，共45個(gè)循環(huán)；95℃1分鐘，4℃保溫。

8.根據(jù)權(quán)利要求5的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(4)中熒光檢測(cè)的條件為：起始溫度為55℃，終止溫度為98℃，待機(jī)溫度為42℃。