[發(fā)明專利]與結(jié)直腸癌化療藥物耐藥相關(guān)的靶點(diǎn)及應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210975133.5
• 申請(qǐng)日: 2022-08-15
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN115317613A
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-11-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳巍;李夏;吳軍舟;倪茂巍;戴五敏;陳忠堅(jiān);陳肖皖
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江省腫瘤醫(yī)院
• 主分類號(hào): A61K45/00
• 分類號(hào): A61K45/00;A61K45/06;A61K31/513;A61K31/255;A61P35/00;C12Q1/6886;G01N33/574;G01N33/573;C12N15/11
• 代理公司: 杭州星河慧專利代理事務(wù)所(普通合伙) 33410
• 代理人: 周麗娟

本發(fā)明公開(kāi)了與結(jié)直腸癌化療藥物耐藥相關(guān)的靶點(diǎn)及應(yīng)用。本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)：硫醇氧化應(yīng)激在5?Fu耐藥性CRC逆轉(zhuǎn)中可能發(fā)揮重要作用，可通過(guò)S?谷胱甘肽依賴性降解TGM2，增強(qiáng)5?Fu誘導(dǎo)的5?Fu耐藥CRC細(xì)胞凋亡，從而增強(qiáng)5?Fu的治療效果。CRC細(xì)胞TMG2蛋白表達(dá)量的變化影響其對(duì)5?Fu的治療敏感性，TGM2與CRC患者對(duì)5?Fu的耐藥性和預(yù)后不良有關(guān)。TGM2有可能作為一個(gè)潛在的治療靶點(diǎn)，并可被硫醇氧化應(yīng)激通過(guò)C193的S?谷胱甘肽化所調(diào)控。較之5?Fu單藥，5?Fu與2?APPA的聯(lián)合，顯著提高結(jié)直腸癌治療效果。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)和制藥領(lǐng)域，具體涉及與結(jié)直腸癌化療藥物耐藥相關(guān)的靶點(diǎn)及應(yīng)用。

背景技術(shù)

結(jié)直腸癌(CRC)是世界上最常見(jiàn)的癌癥之一。根據(jù)2018年全球癌癥統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，CRC在癌癥相關(guān)死亡排名第一，發(fā)病率排名第三。目前，結(jié)直腸癌患者的一線治療方法是手術(shù)聯(lián)合化療藥物。作為結(jié)直腸癌化療中的基礎(chǔ)用藥，5-Fu通過(guò)抑制胸腺嘧啶合成酶的生物活性，阻止結(jié)直腸癌細(xì)胞內(nèi)的DNA合成，進(jìn)一步干擾腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。然而，在罹患結(jié)直腸癌患者身上長(zhǎng)期使用5-Fu容易導(dǎo)致腫瘤對(duì)于5-Fu不敏感。根據(jù)大量的文獻(xiàn)報(bào)道，使用5-Fu作為基藥的化療失敗，其中最重要的原因之一是結(jié)直腸癌患者對(duì)于5-Fu耐藥。尤其令人擔(dān)憂的是，既往對(duì)于5-Fu敏感的結(jié)直腸癌患者，當(dāng)他的腫瘤復(fù)發(fā)時(shí)，更容易表現(xiàn)為對(duì)5-Fu耐藥。晚期結(jié)直腸癌患者對(duì)以5-Fu為基礎(chǔ)的化療的有效率僅為10-15％，超過(guò)80％的晚期結(jié)直腸癌患者最終復(fù)發(fā)，盡管他們最初對(duì)化療有反應(yīng)。對(duì)5-Fu的耐藥性已被視為晚期結(jié)直腸癌化療的主要障礙之一，因此，迫切需要確定治療靶點(diǎn)并制定新的治療策略，以提高結(jié)直腸癌患者對(duì)5-Fu為主的化療的反應(yīng)。

研究表明，CRC對(duì)5-Fu耐藥的機(jī)制有：跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白功能增強(qiáng)，導(dǎo)致胞內(nèi)藥物濃度下降；胸甘酸合成酶(TS)活性增加，拮抗5-Fu抑制TS的作用；二氫嘧啶脫氫酶(DPD)過(guò)表達(dá)，加速5-FU分解代謝；凋亡抑制蛋白家族(IAPs)作用增強(qiáng)，使藥物誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡減少；磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K-Akt)信號(hào)通路、絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)信號(hào)通路等異常激活；熱休克蛋白27(HSP27)高表達(dá)，對(duì)腫瘤細(xì)胞損傷保護(hù)作用增強(qiáng)等。

在上述過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用的分子往往是與腫瘤預(yù)后相關(guān)的生物標(biāo)志物，也是逆轉(zhuǎn)耐藥、改進(jìn)化療效果的重要靶點(diǎn)。由于引起結(jié)直腸癌化療耐藥的原因和機(jī)制眾多，逆轉(zhuǎn)化療耐藥充滿了挑戰(zhàn)，仍需要開(kāi)發(fā)新的有效的治療靶點(diǎn)來(lái)對(duì)抗層出不窮的耐藥成因，需要大量的科學(xué)研究及臨床試驗(yàn)以攻克難關(guān)。因此，積極開(kāi)展對(duì)結(jié)直腸癌耐藥機(jī)制的研究，尋找新的關(guān)鍵分子和治療靶點(diǎn)，對(duì)結(jié)直腸癌的干預(yù)和治療具有重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)結(jié)直腸癌治療中的5-Fu耐藥情況，迫切需要發(fā)現(xiàn)調(diào)控結(jié)直腸癌耐藥的新因子，闡明結(jié)直腸癌耐藥的分子機(jī)制，從而為結(jié)直腸癌臨床治療提供新的靶點(diǎn)和策略。有鑒于此，本發(fā)明的目的就是尋找提高5-Fu耐藥結(jié)直腸癌對(duì)5-Fu敏感性的關(guān)鍵靶點(diǎn)。

為了達(dá)成上述目的，本發(fā)明針對(duì)結(jié)直腸癌耐藥機(jī)制進(jìn)行了相關(guān)研究。

本發(fā)明以小分子化合物2-APPA(CAS號(hào)為1133387-90-2，結(jié)構(gòu)式如下式)

和耐藥結(jié)直腸癌細(xì)胞CT8/5Fu和HCT15/5Fu為例來(lái)進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)：

①加入2-AAPA處理HCT8/5Fu和HCT15/5Fu細(xì)胞后，細(xì)胞中GSH:GSSG比率下調(diào)(2-AAPA起到GR抑制劑的作用)，硫醇氧化應(yīng)激上調(diào)(2-AAPA起到硫醇氧化應(yīng)激誘導(dǎo)劑的作用)，TGM2的mRNA表達(dá)和TGM2蛋白水平下調(diào)(2-AAPA起到抑制TGM2的mRNA表達(dá)和調(diào)低TGM2蛋白水平的作用)，TGM2的S-谷胱甘肽化顯著增加(2-AAPA起到誘導(dǎo)TGM2的S-谷胱甘肽化的作用，C193是TGM2上S-谷胱甘肽化修飾的主要位點(diǎn))，HCT8/5Fu和HCT15/5Fu細(xì)胞對(duì)5-Fu的耐藥性逆轉(zhuǎn)和敏感性增強(qiáng)。