[發明專利]一種副干酪乳桿菌JY062制劑及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202210944148.5
• 申請日: 2022-08-08
• 公開（公告）號: CN115011532B
• 公開（公告）日: 2022-11-15
• 發明（設計）人: 滿朝新;姜毓君;張宇;蘇悅;崔政盈
• 申請（專利權）人: 東北農業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A61K35/747;A61P3/06;A61P3/10;A61P1/16;C12R1/225
• 代理公司: 南京群邁知識產權代理有限公司 32690
• 代理人: 安士影

1.一種副干酪乳桿菌JY062制劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟一，將副干酪乳桿菌JY062（Lactobacillus paracasei JY062）以5%接種量接種至MRS培養基，32-37℃培養16-18 h后，三區劃線于MRS固體培養基上，培養后挑取單菌落于MRS培養基中，傳代培養兩代后6000-8000 r/min離心至少10 min，收集發酵上清液，菌泥用PBS洗滌至少兩次后，再用PBS重懸，使菌懸液活菌數至少達10⁹CFU/mL；

步驟二，離心菌懸液，收集菌泥，將制劑溶液的組分一加入到菌泥中，菌泥與組分一的體積比為1:4，充分混勻制成菌懸液二；

步驟三，再在菌懸液二中加入制劑溶液的組分二，混勻，獲得菌懸液三；

步驟四，將菌懸液三置于恒溫水浴鍋中，35-37℃靜置至少20 min后，真空冷凍干燥，獲得菌粉；

所述制劑溶液的組分一包括以下質量百分數的組分：脫脂乳10~20%，海藻糖8~12％，麥芽糖糊精4~6％，L-谷氨酸鈉2~4％和余量的水；

所述制劑溶液的組分二包括：2'-巖藻糖基乳糖，所述2'-巖藻糖基乳糖的加入體積相當于組分一的1~3%，組分二為5-10wt%的2'-巖藻糖基乳糖水溶液；

所述菌粉的活菌數至少為1.23×10¹¹ CFU/mL。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述MRS培養基的配方如下：蛋白胨5.0 g，胰蛋白胨10.0 g，牛肉膏5.0 g，酵母粉5.0 g，葡萄糖20.0 g，檸檬酸氫二銨2.6 g，磷酸氫二鉀2.0 g，乙酸鈉5.0 g，硫酸鎂0.58 g，硫酸錳0.25 g，Tween-80 1 mL；MRS培養基的制備方法為：按照上述配方準確稱取各組分定容于1000 mL蒸餾水中，混勻后，pH調至5.8，121℃滅菌15 min，4℃保存備用。

3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述MRS固體培養基的配方如下：蛋白胨10.0 g，牛肉膏8.0 g，酵母粉4.0 g，葡萄糖20.0 g，檸檬酸氫二銨2.0 g，磷酸氫二鉀2.0g，乙酸鈉5.0 g，硫酸鎂0.2 g，硫酸錳0.04 g，瓊脂14.0 g，Tween-80 1 mL；MRS固體培養基的制備方法為：按照上述配方準確稱取各組分定容于1000 mL蒸餾水中，混勻后，pH調至5.8，121℃滅菌15 min，

放入60℃恒溫水浴鍋中備用。

4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述真空冷凍干燥的工藝為：將處理好的菌懸液三放入超低溫冰箱中進行預凍，預凍溫度為-80℃，時間是2 h；預先開啟真空冷凍干燥機，將預凍好的菌懸液三放到真空冷凍干燥機的隔板上，抽真空進行冷凍干燥，凍干機冷阱溫度為-53.2℃，真空度為0.162 mbar，時間為24 h。

5.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述PBS為0.1 mol/L，pH值6.8。

6.根據權利要求1~5任意一項所述的制備方法獲得的制劑。

7.根據權利要求6所述的制劑在制備改善糖脂代謝紊亂的藥物中的應用。

8.根據權利要求6所述的制劑在制備改善糖脂代謝紊亂引起的肝損傷的藥物中的應用。