[發明專利]一種總淀粉檢測試劑盒及其檢測方法

有效

• 申請號: 202210916449.7
• 申請日: 2022-08-01
• 公開（公告）號: CN115447886B
• 公開（公告）日: 2023-08-25
• 發明（設計）人: 張志云;秦超
• 申請（專利權）人: 廣州譜優峰科技有限公司
• 主分類號: B65D25/10
• 分類號: B65D25/10;B65D81/18;G01N21/78;G01N21/31
• 代理公司: 廣州專理知識產權代理事務所(普通合伙) 44493
• 代理人: 王允輝

1.一種總淀粉檢測試劑盒，其特征在于：包括方體結構的溫控試劑盒體，所述溫控試劑盒體的前側壁上分布有多個相互平行的，由上到下排列的調節孔，溫控試劑盒體的頂面上開有試劑存取口，試劑存取口處設有封閉的膠塞，溫控試劑盒體內設有豎軸，所述豎軸上安裝有多個轉動盤，所述豎軸上且位于相鄰轉動盤之間設有隔套，所述隔套通過螺絲固定在豎軸上，所述多個轉動盤的一部分分別從對應的所述調節孔中伸出到溫控試劑盒體外，每個所述的轉動盤上設有7個試劑存放槽和1個通孔，7個試劑存放槽的槽口和所述的通孔位于轉動盤的盤面上且沿著轉動盤的圓周方向均布，并且用手撥動轉動盤的位于溫控試劑盒體外的部分，轉動盤轉動相應的角度，7個試劑存放槽的槽口和所述的通孔都能與試劑存取口相對應；所述7個試劑存放槽的槽口處設有覆膜膠塞，所述7個試劑存放槽用以存放淀粉檢測試劑組分；

所述轉動盤的盤面邊緣和轉動盤的圓周面上都設有8個與所述的7個試劑存放槽及1個所述的通孔相對應的標記，所述標記處設有標號，所述溫控試劑盒體上且位于調節孔的一側設有參照點，當標記與參照點對齊時，與該標記對應的試劑存放槽或通孔，與其上方的所述試劑存取口相對應；

與所述的通孔對應的標記處的標號為數字0，7個試劑存放槽對應的標記處的標號依次為數字1、2、3、4、5、6、7；所述的淀粉檢測試劑組分包括7種試劑，其中，試劑1為2.2mL的耐熱性淀粉酶，試劑2為16mL的淀粉葡萄糖苷酶，試劑3為60mL提取液，試劑4為85mL抗性淀粉緩沖液，試劑5為500mg/g的標準淀粉液，試劑6和試劑7分別為R1、R2雙試劑，其中，22mL試劑6的R1中，苯酚含量為12mmol/L；12mL試劑7的R2中，每升含葡萄糖氧化酶26KU、過氧化物酶4KU、4-氨基安替比林4.8mmol、磷酸鉀0.8mmol和疊氮化鈉1g；所述的試劑1、試劑2、試劑3、試劑4、試劑5、試劑6和試劑7分別依次放在1、2、3、4、5、6、7號的試劑存放槽內；

所述轉動盤的圓周面上均布有8個卡槽，所述溫控試劑盒體內焊接有多個彈性金屬卡片，多個彈性金屬卡片由上到下排成一排，并與多個轉動盤相對應，當彈性金屬卡片位于轉動盤的卡槽中，有相應的所述標記與所述的參照點相對齊。

2.根據權利要求1所述的總淀粉檢測試劑盒，其特征在于：所述溫控試劑盒體內分隔為試劑放置腔、溫控室、氣流腔和電池放置腔，所述的轉動盤位于試劑放置腔內，溫控室和電池放置腔設在試劑放置腔的左側，并且電池放置腔設在溫控室的下方，氣流腔設在試劑放置腔的后部，所述溫控室中設有隔熱板，隔熱板將溫控室分隔為散熱腔和循環送風腔，循環送風腔與氣流腔相通，氣流腔與試劑放置腔之間為導風隔板，導風隔板上分布有多個導風孔，多個導風孔排成一排，并且位于最上層轉動盤的上方，試劑放置腔與循環送風腔之間的隔板上開有回風口，循環送風腔內安裝有循環風機；隔熱板上開有安裝孔，所述安裝孔中安裝有半導體制冷制熱板，半導體制冷制熱板的一端通過轉軸安裝在隔熱板上的安裝孔內壁處，半導體制冷制熱板的另一端與調節軸的一端連接，調節軸的另一端從隔熱板內伸出到溫控試劑盒體外與調節手輪固定連接。

3.根據權利要求2所述的總淀粉檢測試劑盒，其特征在于：所述半導體制冷制熱板的一側板面為制冷板面，另一側板面為制熱板面，在制冷板面和制熱板面上都分布有多個散熱片。

4.根據權利要求3所述的總淀粉檢測試劑盒，其特征在于：所述的多個散熱片組成一個圓柱狀結構。

5.根據權利要求4所述的總淀粉檢測試劑盒，其特征在于：還包括控制器、多個溫度傳感器和多個指示燈，多個指示燈對應多個溫度傳感器，所述多個溫度傳感器分別用以檢測多個轉動盤的溫度，多個指示燈安裝在溫控試劑盒體的前側壁上，多個溫度傳感器將溫度信息傳送給控制器，當轉動盤的溫度滿足預設值時，控制器將對應的指示燈調控為綠色光，當轉動盤的溫度不滿足預設值時，控制器將對應的指示燈調控為紅色光，并控制半導體制冷制熱板的電源通斷，所述電池放置腔中的電池為控制器、溫度傳感器、指示燈和循環風機供電。

6.根據權利要求5所述的總淀粉檢測試劑盒，其特征在于：所述溫控試劑盒體的側壁上設有與散熱腔相通的進風口和排風口，半導體制冷制熱板位于進風口和排風口之間，所述排風口處設有排風扇。

7.利用權利要求6所述總淀粉檢測試劑盒進行總淀粉檢測的方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟1，淀粉檢測試劑組分的存放：淀粉檢測試劑組分存放在所述的總淀粉檢測試劑盒中，溫度控制在2～8?℃；淀粉檢測試劑組分包括7種試劑，其中，試劑1為2.2mL的耐熱性淀粉酶，試劑2為16mL的淀粉葡萄糖苷酶，試劑3為60mL提取液，試劑4為85mL抗性淀粉緩沖液，試劑5為500mg/g的標準淀粉溶液，試劑6和試劑7分別為R1、R2雙試劑，其中，22mL試劑6的R1中，苯酚含量為12mmol/L；12mL試劑7的R2中，每升含?葡萄糖氧化酶26KU、過氧化物酶4KU、4-氨基安替比林4.8mmol、磷酸鉀0.8mmol和疊氮化鈉1g；所述的試劑1、試劑2、試劑3、試劑4、試劑5、試劑6和試劑7分別依次放在1、2、3、4、5、6、7號的試劑存放槽內；

步驟2，淀粉檢測試劑組分的使用前的準備：在淀粉檢測試劑組分使用前，轉動總淀粉檢測試劑盒上的調節手輪，對半導體制冷制熱板進行翻轉，由制冷模式變為制熱模式，當總淀粉檢測試劑盒內最上層轉動盤的溫度傳感器所傳送的溫度達到25以上時，關閉半導體制冷制熱板，停止加熱；

步驟3，樣本預處理：所有樣本經過粉碎后過?35?目篩備用，具體的預處理方法如下：

A.?對于不含抗性淀粉、D-葡萄糖和麥芽糊精的樣本，按如下方式進行處理：

A1.?取?0.1g?樣本于消解管中，轉動總淀粉檢測試劑盒最上層的轉動盤，將標號3與所述的參照點相對齊，使3號試劑存放槽與其上方的所述試劑存取口相對應，移液器穿過試劑存取口處的膠塞以及3號試劑存放槽處的覆膜膠塞將270ml純水加入到加入?3號試劑存放槽中，對試劑3進行稀釋，然后從3號試劑存放槽中取5ml?稀釋后的試劑3，加入到消解管中；

A2.?轉動總淀粉檢測試劑盒最上層的轉動盤，將標號1與所述的參照點相對齊，使1號試劑存放槽與其上方的所述試劑存取口相對應，移液器穿過試劑存取口處的膠塞以及1號試劑存放槽處的覆膜膠塞，抽取?0.02ml的試劑?1，并加入到步驟A1所述的消解管中，將消解管放在水浴鍋中沸水浴?15min，期間每隔?5min?強力震蕩一次；沸水浴結束后，將消解管放入到常溫水中，至少?2min?后取出，然后轉動總淀粉檢測試劑盒最上層的轉動盤，將標號2與所述的參照點相對齊，利用移液器從總淀粉檢測試劑盒最上層的轉動盤上2號試劑存放槽中抽取150μl的試劑?2，并加入到消解管中，將消解管放在水浴鍋中進行60℃水浴，水浴時間為?30min；

A3.?水浴結束后,將消解管放入離心機中，以?5000rpm的轉速進行離心處理，離心時間為5min，使互不相溶的液體分開，然后取出消解管內的上清液，用純水進行8倍稀釋后，進入雙試劑的淀粉檢測工序；

B.?對于含有抗性淀粉但不含?D-葡萄糖和/或麥芽糊精的樣本，按如下步驟處理：

B1.?取?0.1g?粉碎樣本于消解管中，在冰浴條件下，邊攪拌邊加入預冷的2M?氫氧化鈉溶液，磁力攪拌?20min，然后轉動總淀粉檢測試劑盒最上層的轉動盤，將標號4與所述的參照點相對齊，使4號試劑存放槽與其上方的所述試劑存取口相對應，移液器穿過試劑存取口處的膠塞以及4號試劑存放槽處的覆膜膠塞，抽取?0.8mL?的試劑?4，并加入到消解管中，

使得?pH?為?5.2，從3號試劑存放槽中抽取稀釋后的試劑3加入到消解管中，將消解管中的液體補足到5ml；

B2.?按照上述步驟A中的A2步驟開始處理消解管內5ml的液體；

C.?對于不含抗性淀粉但含?D-葡萄糖和/或麥芽糊精的樣本，按如下方式處理：

C1.?取?0.1g?粉碎樣本于離心管中，加入?10ml的體積百分比濃度為80%的乙醇溶液，在80℃環境下孵育5min，然后將離心管放入離心機中，以?5000rpm的轉速進行離心處理，離心時間為5min，使互不相溶的液體分開，棄掉離心管內的上清液，然后向離心管內加入10ml的體積百分比濃度為80%的乙醇溶液，將離心管放入旋渦儀中，旋渦震蕩混合?2min；再將離心管取出并放入到離心機中，以?5000rpm的轉速進行離心處理，離心時間為5min，使互不相溶的液體分開，棄掉離心管內的上清液；

C2.?按照步驟A中的步驟A1中的方式對3號試劑存放槽中的試劑3進行稀釋，向離心管內加入?5mL?稀釋后的試劑3，然后從步驟A中的步驟A2開始處理操作；

D.對于含有抗性淀粉且含有?D-葡萄糖和/或麥芽糊精的樣本，按如下方式處理：

D1.?取?0.1g?粉碎樣本于離心管中，加入?10mL?的體積百分比濃度為80%的乙醇溶液，在80℃環境下孵育?5min，然后將離心管放入離心機中，以?5000rpm的轉速進行離心處理，離心時間為5min，使互不相溶的液體分開，棄掉離心管內的上清液，然后向離心管內加入10ml的體積百分比濃度為80%的乙醇溶液，將離心管放入旋渦儀中，旋渦震蕩混合?2min；再將離心管取出并放入到離心機中，以?5000rpm的轉速進行離心處理，離心時間為5min，使互不相溶的液體分開，棄掉離心管內的上清液；

D2.?然后按照上述步驟B?的步驟進行處理后；

步驟4，雙試劑的淀粉檢測：對步驟3預處理后的樣本進行淀粉檢測包括以下步驟：

S1、定標：轉動總淀粉檢測試劑盒最上層的轉動盤，將標號5與所述的參照點相對齊，使5號試劑存放槽與其上方的所述試劑存取口相對應，移液器穿過試劑存取口處的膠塞以及5號試劑存放槽處的覆膜膠塞，抽取16μL的試劑?5，并加入到1.5mL?離心管中；然后將16μL0mg/g?淀粉標準液加入到1.5mL?離心管中；轉動總淀粉檢測試劑盒最上層的轉動盤，將標號6與所述的參照點相對齊，使6號試劑存放槽與其上方的所述試劑存取口相對應，移液器穿過試劑存取口處的膠塞以及6號試劑存放槽處的覆膜膠塞，抽取R1到試管中，轉動總淀粉檢測試劑盒最上層的轉動盤，將標號7與所述的參照點相對齊，使7號試劑存放槽與其上方的所述試劑存取口相對應，移液器穿過試劑存取口處的膠塞以及7號試劑存放槽處的覆膜膠塞，抽取R2到試管中，R1?和?R2?試劑以?2:1?體積混合，將500μL的R1?和?R2試劑混合液，加入到所述的1.5mL?離心管中，在室溫或者?37℃的環境下，孵育?20min，然后用分光光度計檢測?505nm?吸光度，經過多次實驗，建立淀粉濃度和吸光度的標準曲線；

S2、樣品檢測：取一個1.5mL離心管，加入步驟3預處理后的樣本16μL，然后加入R1和R2混合試劑500μL，室溫或者37℃孵育20min，用分光光度計檢測?505nm?吸光度，根據淀粉濃度和吸光度的標準曲線，得到樣品的淀粉濃度；

步驟5，當總淀粉檢測試劑盒最上層轉動盤上的淀粉檢測試劑組分使用完時，使最上層轉動盤的標號0與所述的參照點相對齊，使最上層轉動盤上的通孔與其上方的所述試劑存取口相對應，移液器穿過試劑存取口處的膠塞以及所述的通孔，對第二層轉動盤上的淀粉檢測試劑組分進行抽取，以此類推，直到將總淀粉檢測試劑盒中所有轉動盤上的淀粉檢測試劑組分使用完后，再將總淀粉檢測試劑盒中的轉動盤取出，進行清洗和干燥處理后，在各個轉動盤中的試劑存放槽中置入相對應的新的淀粉檢測試劑組分，投入下一次的實驗工作。