[發明專利]一種呼吸道內吸入用復方異丙托溴銨藥物的檢測方法

有效

• 申請號: 202210893615.6
• 申請日: 2022-07-27
• 公開（公告）號: CN115372502B
• 公開（公告）日: 2023-08-01
• 發明（設計）人: 楊嫻;候海婷;趙方紅;左亞茹;曹柳;李磊;孫曉飛
• 申請（專利權）人: 石家莊四藥有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 河北國維致遠知識產權代理有限公司 13137
• 代理人: 任青

1.一種呼吸道內吸入用復方異丙托溴銨藥物的檢測方法，其特征在于：所述檢測方法包括以下步驟：

步驟一、分別制備空白支氣管線性溶液、空白肺組織線性溶液、含內標物的支氣管待測液和含內標物的肺組織待測液；

所述含內標物的支氣管待測液的制備過程如下：

在緩沖溶液中加入樣品支氣管勻漿，再分別加入稀釋液、內標工作液和無水乙醇，渦旋0.8min~1.5min，再加入乙酸乙酯渦旋4.5min~5.5min，萃取得有機相和水相；

向所述水相中加入無水乙醇和乙酸乙酯進行二次萃取，并將兩次萃取得到的有機相混合，經35℃~40℃氮氣吹干后再加入復溶液復溶，得所述含內標物的支氣管待測液；

所述含內標物的肺組織待測液的制備過程如下：

在緩沖溶液中加入樣品肺組織勻漿，再分別加入稀釋液、內標工作液和無水乙醇，渦旋0.8min~1.5min，再加入乙酸乙酯渦旋4.5min~5.5min，萃取得有機相和水相；

向所述水相中加入無水乙醇和乙酸乙酯進行二次萃取，并將兩次萃取得到的有機相混合，經35℃~40℃氮氣吹干后再加入復溶液復溶，得所述含內標物的肺組織待測液；

所述緩沖溶液為體積比為0.8~1.2:0.8~1.2的乙酸銨水溶液和氨水，所述乙酸銨水溶液的濃度為4.8mol/L~5.2mol/L，所述氨水的濃度為25wt%~28wt%；

步驟二、采用液相色譜-質譜聯用法分別檢測所述線性溶液和所述待測液中的硫酸沙丁胺醇和異丙托溴銨，其中，所述液相色譜的條件為：

以C18柱為色譜柱，以含有0.2%甲酸和5mM乙酸銨的水溶液為流動相A，以含有0.2%甲酸和5mM乙酸銨的甲醇溶液為流動相B，梯度洗脫，柱溫為10℃~25℃；

所述梯度洗脫的程序如下：

0min-0.5min，90%流動相A，10%流動相B；

0.5min-2min，90%→10%流動相A，10%→90%流動相B；

2min-3.5min，10%流動相A，90%流動相B；

3.5min-3.51min，10%→90%流動相A，90%→10%流動相B；

3.51min-4min，90%流動相A，10%流動相B；

所述色譜柱的型號為Waters?BEH?C18，規格為50mm×2.1mm×1.7μm；

所述質譜采用ESI離子源，正離子檢測模式，離子源參數為：氣簾氣壓力為20psi，噴霧電壓為5500V，霧化溫度為550℃，霧化氣壓力為55psi，輔助氣壓力為50psi，碰撞氣壓力為9psi。

2.如權利要求1所述的呼吸道內吸入用復方異丙托溴銨藥物的檢測方法，其特征在于：

所述硫酸沙丁胺醇的參數為：母離子為240.2m/z，子離子為148.3m/z，去簇電壓為40V，射入電壓為12V，碰撞電壓為30V，碰撞室射出電壓為8V；和/或

所述異丙托溴銨的參數為：母離子為333.4m/z，子離子為167.1m/z，去簇電壓為120V，射入電壓為12V，碰撞電壓為35V，碰撞室射出電壓為8V。

3.如權利要求1所述的呼吸道內吸入用復方異丙托溴銨藥物的檢測方法，其特征在于：所述內標物為氘代硫酸沙丁胺醇和氘代異丙托溴銨；其中，所述氘代硫酸沙丁胺醇的參數為：母離子為249.4m/z，子離子為149m/z，去簇電壓為40V，射入電壓為10V，碰撞電壓為30V，碰撞室射出電壓為8V；所述氘代異丙托溴銨的參數為：母離子為340.3m/z，子離子為174.3m/z，去簇電壓為100V，射入電壓為10V，碰撞電壓為35V，碰撞室射出電壓為8V。

4.如權利要求1所述的呼吸道內吸入用復方異丙托溴銨藥物的檢測方法，其特征在于：流速為0.28mL/min~0.32mL/min，進樣量為10μL。