[發(fā)明專利]一種基于金納米顆粒粘合劑介導(dǎo)的多中心/DNA核殼型納米復(fù)合物及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210883124.3
• 申請日: 2022-07-26
• 公開（公告）號: CN116327969A
• 公開（公告）日: 2023-06-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 吳再生;李叢叢;高艷莎;羅沙沙;李倩
• 申請（專利權(quán)）人: 福州大學(xué)
• 主分類號: A61K47/54
• 分類號: A61K47/54;A61K47/69;A61K47/52;A61K31/704;A61P35/00;B82Y5/00
• 代理公司: 福州元創(chuàng)專利商標(biāo)代理有限公司 35100
• 代理人: 彭琴;蔡學(xué)俊

1.一種基于金納米顆粒粘合劑介導(dǎo)的多中心/DNA核殼型納米復(fù)合物，其特征在于：所述多中心/DNA核殼型納米復(fù)合物包括小尺寸金納米顆粒AuNP、硫醇化連接探針CDS與硫醇化連接探針部分互補的序列cCDS和回文介導(dǎo)的適配體功能化四面體串珠Apt-Nano-Tetra；

所述小尺寸金納米顆粒AuNP為通過檸檬酸鈉還原法制備獲得，其直徑為5nm；

所述硫醇化連接探針CDS為：5’-TTCAGACCTCCGTTAACAATTTTTTTTTTTTGCTGCTGCTGCTGCTTTTTT-SH-3’；

所述與硫醇化連接探針部分互補的序列cCDS為：5’-GCAGCAGCAGCAGCA-3’；

所述回文介導(dǎo)的適配體功能化四面體串珠Apt-Nano-Tetra由以下5條DNA鏈構(gòu)成：

T_a：5’-ATTGTTAACGGAGGTCTGAATTTTTGCTGTGATGCACCTAGTATGATACCGCCGAGAGTGTATTGGACCTCGCAT-3’；

T_b：5’-GTAAGGATTCAGACTTTCTAGGTGCATCACAGCTCCAGCTTGCTACACTGTTTTTGAGATCGATCTC-3’；

T_c:?5’-ACTAGGAGAGGGTTGATCAGTGTAGCAAGCTGGTATGCGAGGTCCAATACTTTTTTGTTCGTATTCCTATTCGTC-3’；

T_d:?5’-AAGTCTGAATCCTTACTTCAACCCTCTCCTAGTTCTCTCGGCGGTATCATTTTTTGAGATCGATCTC-3’；

E-sgc8:?5’-ATCTAACTGCTGCGCCGCCGGGAAAATACTGTACGGTTAGATTTTTGACGAATAGGAATACGAAC-3’。

2.一種如權(quán)利要求1所述的基于金納米顆粒粘合劑的多中心?DNA?納米復(fù)合物的構(gòu)建方法，其特征在于：包括以下步驟：

1）通過檸檬酸鈉還原法制備直徑為5?nm的小尺寸金納米顆粒AuNP；

2）將0.5?μL?10?mM?三(2-羧乙基)膦添加到40?μL?100μM硫醇化連接探針CDS中，并在室溫下孵育1小時對巰基進行還原；

3）在輕輕搖動下將步驟2）還原處理的溶液緩慢添加至1?mL、67?nM?小尺寸金納米顆粒AuNP中，并在黑暗中反應(yīng)16?h；在加入10.4?μL、500?mM、pH?8.2?Tris-醋酸鹽緩沖液后，緩慢滴加300?μL、1M?NaCl?溶液，然后在黑暗中輕輕搖動孵育24小時，通過MWCO?=10?kD超濾管10000?rpm離心10分鐘純化，將沉淀物用?Tris緩沖液洗滌3次，然后分散在1.34?mL的1×TAE/Mg²⁺?緩沖液中，得到的溶液稱為AuNP-CDS，其終濃度50?nM，在使用前儲存在4℃；

4）Apt-Nano-Tetra的制備：將等量的4?μL、10?μM的T_a、T_b、T_c、T_d和E-sgc8混合并在90℃加熱5分鐘，然后緩慢冷卻至室溫，所得產(chǎn)物Apt-Nano-Tetra的終濃度為?2?μM，并儲存在?4℃；

5）Apt-ADMC的制備：取?20?μL、50?nM?AuNP-CDS?與?4?μL、10?μM?cCDS在37℃下孵育1h，所得產(chǎn)物稱為?AuNP-dsDNA，然后，加入20?μL、2?μMApt-Nano-Tetra，并充分混合，然后在黑暗中孵育4?h，10000?rpm離心10?分鐘，棄去上清液后，將沉淀物分散在20?μL的1?×TAE/Mg²⁺?緩沖液中，得到Apt-ADMC，其最終表觀濃度為10?nM；

6）藥物裝載：步驟5）中所得混合液中加入化療藥物阿霉素Dox，在37℃下孵育過夜，得到Dox-Apt-ADMC。