[發明專利]一種煙草羥基香葉基芳樟醇二萜烯醇糖苷的分析方法及二維液相色譜質譜聯用系統

在審

• 申請號: 202210865615.5
• 申請日: 2022-07-21
• 公開（公告）號: CN115184503A
• 公開（公告）日: 2022-10-14
• 發明（設計）人: 王天南;陳敏;董惠忠;李俊杰;吳達;劉百戰
• 申請（專利權）人: 上海煙草集團有限責任公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/72;G01N30/46
• 代理公司: 上海光華專利事務所(普通合伙) 31219
• 代理人: 金彥;許亦琳

本發明提供一種煙草羥基香葉基芳樟醇二萜烯醇糖苷的分析方法及二維液相色譜質譜聯用系統。該方法包括如下步驟：對煙葉進行前處理，采用二維液相色譜質譜聯用法對前處理所得待測樣品進行定性定量分析：通過第一維液相色譜分離出目標組分，目標組分經補液稀釋后進行捕集，再將捕集成分洗脫后由第二維液相色譜進行分離，通過質譜進行定性定量分析。該系統包括第一維液相色譜、補償泵、連通接口、切換閥、捕集柱、第二維液相色譜、質譜和紫外檢測器。本發明靈敏度高、準確性好，實現7種HGL?DTGs半定量測定。

技術領域

本發明屬于煙草化學技術領域，涉及一種煙草羥基香葉基芳樟醇二萜烯醇糖苷的分析方法及二維液相色譜質譜聯用系統。

背景技術

羥基香葉基芳樟醇二萜烯醇糖苷(HGL-DTGs)，是煙草莖葉組織中一種豐富的次級代謝產物，通過生長過程中次級代謝途徑介導，具有較強的抗蟲性。HGL-DTGs結構式如下，由1個17-羥基香葉醇主鏈構成，在主鏈的C3和C17位置上分別與葡萄糖、鼠李糖等單元形成2個不同的支鏈基團(R₁、R₂)，且R₂又配合丙二酰亞胺在C6共同修飾，最終形成多種不同的HGL-DTGs異構體。

由于HGL-DTGs是一組較為復雜的煙草次級代謝產物，且煙草組成復雜、基質效應明顯，對其準確測定難度較大。目前僅有HGL-DTGs定性分析方法報道，前處理步驟較為繁瑣，涉及多步富集、分離和制備等步驟，尚無煙草HGL-DTGs定量和半定量的分析方法報道。

發明內容

鑒于以上所述現有技術的缺點，本發明的目的在于提供一種煙草羥基香葉基芳樟醇二萜烯醇糖苷的分析方法及二維液相色譜質譜聯用系統，靈敏度高、準確性好，實現7種HGL-DTGs半定量測定。

為實現上述目的及其他相關目的，本發明第一方面提供一種煙草羥基香葉基芳樟醇二萜烯醇糖苷的分析方法，包括如下步驟：對煙葉進行前處理，采用二維液相色譜質譜聯用法對前處理所得待測樣品進行定性定量分析：通過第一維液相色譜分離出目標組分，目標組分經補液稀釋后進行捕集，再將捕集成分洗脫后由第二維液相色譜進行分離，通過質譜進行定性定量分析。

優選地，所述前處理包括如下步驟：

1)將所述煙葉在液氮下粉碎和磨粉；

2)將步驟1)得到的煙葉在有機溶劑中進行振蕩，離心后過膜，即得待測樣品。

優選地，還包括如下技術特征中的至少一項：

a)所述第一維液相色譜的條件為：第一維液相色譜：反相液相色譜；第一維色譜柱：CAPCELL PAK MGIII C18(50mm×2.0mm，3μm)；流速：0.05～1mL/min；柱溫：20～60℃；進樣量：1～20.0μL；第一維流動相A相：水+0.05～2％甲酸；第一維流動相B相：甲醇+0.05～2％甲酸；梯度淋洗；

b)所述第二維液相色譜的條件為：第二維液相色譜：反相液相色譜；第二維色譜柱：Agilent ZORBAX 300SB C18(2.1mm×100mm，3.5μm)；流速：0.05～1mL/min；柱溫：20～60℃；第二維流動相A相：水+0.05～2％甲酸；第二維流動相B相：乙腈+0.05～2％甲酸；梯度淋洗。

更優選地，特征a)中，所述梯度淋洗的具體程序為：

0～5min，第一維流動相A相：第一維流動相B相體積比為70：30；

5～20min，第一維流動相A相：第一維流動相B相體積比為70：30～5：95；

20～25min，第一維流動相A相：第一維流動相B相體積比為5：95；

25～26min，第一維流動相A相：第一維流動相B相體積比為5：95～70：30；