[發明專利]一種小鼠頸動脈血管組織單細胞懸液的制備方法及其應用在審
| 申請號： | 202210837887.4 | 申請日： | 2022-07-16 |
| 公開（公告）號： | CN115141792A | 公開（公告）日： | 2022-10-04 |
| 發明（設計）人： | 朱力;李豐產;唐朝君;杜赟 | 申請（專利權）人： | 蘇州大學 |
| 主分類號： | C12N5/071 | 分類號： | C12N5/071;C12Q1/6869 |
| 代理公司： | 北京博識智信專利代理事務所(普通合伙) 16067 | 代理人： | 湯敏妮 |
| 地址： | 215031 *** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 小鼠 頸動脈 血管 組織 單細胞 制備 方法 及其 應用 | ||
1.一種小鼠頸動脈血管組織單細胞懸液的制備方法，其特征在于，包含如下過程：
S1：小鼠麻醉后使用預冷的PBS進行心臟灌流，剔除頸動脈周圍組織；
S2：將頸動脈縱向剖開，放入含1.5％FBS的六孔板中；
S3：用手術剪刀將每根頸動脈血管剪成約為2mm2的4段，吸入1.5mL EP管中，2000rpm離心5分鐘以沉淀血管組織；
S4：用HBSS溶液配制1mL組織解離RA工作液；
S5：每管加入500μL解離工作液，放入37℃水浴鍋中加熱解離1小時；
S6：每間隔10分鐘使用1mL移液槍吹打一次；
S7：1小時后加入500μL 5％FBS混勻，使用40μm濾器進行過濾；
S8：放入離心機中，1000rpm離心5分鐘；
S9：吸棄上清后加入200μL組織解離RB工作液；
S10：放入37℃水浴鍋消化5分鐘，期間每隔1分鐘輕輕吹打一次；
S11：使用200μL 5％FBS終止消化，1000rpm離心5分鐘；
S12：吸棄上清，用100μL PBS重懸；
S13：使用細胞計數儀檢測細胞懸液中細胞濃度和活率。
2.根據權利1所述的一種小鼠頸動脈血管組織單細胞懸液的制備方法，其特征在于：步驟S4所述的組織解離RA工作液包含1mg/mLⅡ型膠原酶和0.02mg/mL DNA酶。
3.根據權利1所述的一種小鼠頸動脈血管組織單細胞懸液的制備方法，其特征在于：步驟S9所述的組織解離RB工作液中，HBSS和0.25％無EDTA胰酶的比例配置為1:1。
4.根據權利1-3任一項所述的制備方法在單細胞測序和流式檢測相關領域中的應用。
5.如權利要求4所述的應用，其特征在于，使用10×Genomics平臺Chromium SingleCell 3′Reagent Kits v3試劑對單細胞懸液進行單細胞轉錄組測序，對原始測序數據使用CellRanger軟件進行基因匹配分析，獲得高品質的單細胞測序數據。
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