[發明專利]線粒體異檸檬酸脫氫酶的活性檢測系統及其應用

有效

• 申請號: 202210828923.0
• 申請日: 2022-07-15
• 公開（公告）號: CN114908139B
• 公開（公告）日: 2022-10-04
• 發明（設計）人: 賈映彤;鄭振慧;王旭;張騫豐;鄭豪亮;馬玉嶺
• 申請（專利權）人: 北京索萊寶科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/32
• 分類號: C12Q1/32
• 代理公司: 北京康信知識產權代理有限責任公司 11240
• 代理人: 金田蘊

1.一種線粒體異檸檬酸脫氫酶的活性檢測系統，其特征在于，包括：

提取液一：包括蔗糖、乙二胺四乙酸二鈉、氯化鈉、牛血清白蛋白、聚乙烯吡咯烷酮和緩沖液一；

提取液二：包括蛋白酶抑制劑溶液；

提取液三：包括表面活性劑和緩沖液一；

試劑一：包括氯化鎂、異檸檬酸和緩沖液一；

試劑二：包括煙酰胺腺嘌呤雙核苷酸、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、牛血清白蛋白、疊氮鈉、乙二胺四乙酸二鈉和蒸餾水；

試劑三：包括2,4-二硝基苯肼、鹽酸和蒸餾水；

試劑四：包括水溶性無機堿和蒸餾水；

標準品：包括α-酮戊二酸和蒸餾水；以及

分光光度計或者酶標儀，設置為檢測505nm下的吸光度。

2.根據權利要求1所述的活性檢測系統，其特征在于，所述提取液一由0.1~0.5g蔗糖、1~5 mg 乙二胺四乙酸二鈉、0.1~1g 氯化鈉、0.01~0.1g 牛血清白蛋白、0.1~1g 聚乙烯吡咯烷酮和50mL pH為7.0~7.4之間的緩沖液一組成。

3.根據權利要求1所述的活性檢測系統，其特征在于，所述提取液二包括選自由苯甲基磺酰氟、乙二胺四乙酸二鈉、亮抑蛋白酶肽、抑糜朊酶素、(3S)-7-氨基-1-氯-3-磺酰氨基-2-庚酮鹽酸鹽和L-1,4'-甲基磺酰基-2-苯基乙基氯甲基酮組成的組中的一種或多種，濃度為0.1~1mol/L。

4.根據權利要求1所述的活性檢測系統，其特征在于，所述提取液三由10~50μL表面活性劑和50mL pH為7.0~7.4之間的緩沖液一組成。

5.根據權利要求4所述的活性檢測系統，其特征在于，所述表面活性劑為曲拉通X-100、吐溫80和聚乙二醇中的一種或多種。

6.根據權利要求1所述的活性檢測系統，其特征在于，所述試劑一由10~20mg氯化鎂、2~20mg異檸檬酸和50mL pH為7.0~7.4之間的緩沖液一組成。

7.根據權利要求1所述的活性檢測系統，其特征在于，所述緩沖液一為 pH值為中性的緩沖液。

8.根據權利要求7所述的活性檢測系統，其特征在于，所述緩沖液一為三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽溶液、磷酸鹽緩沖液或4-羥乙基哌嗪乙磺酸溶液。

9.根據權利要求8所述的活性檢測系統，其特征在于，所述緩沖液一為0.01~0.1M三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽溶液。

10.根據權利要求1所述的活性檢測系統，其特征在于，所述試劑二由5~30mg煙酰胺腺嘌呤雙核苷酸、0.1~1g磷酸氫二鉀、0.05~0.5g磷酸二氫鉀、0.1~1g牛血清白蛋白、0.01~0.1g疊氮鈉、0.005~0.05g乙二胺四乙酸二鈉和50mL蒸餾水組成。

11.根據權利要求10所述的活性檢測系統，其特征在于，所述磷酸氫二鉀由磷酸氫二鈉代替，所述磷酸二氫鉀由磷酸二氫鈉代替。

12.根據權利要求1所述的活性檢測系統，其特征在于，所述試劑三由10~50mg 2,4-二硝基苯肼、2~10mL鹽酸和20mL蒸餾水組成。

13.根據權利要求1所述的活性檢測系統，其特征在于，所述試劑四由2~20g水溶性無機堿和50mL蒸餾水組成。

14.根據權利要求13所述的活性檢測系統，其特征在于，所述水溶性無機堿為氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉中一種或多種。

15.根據權利要求1所述的活性檢測系統，其特征在于，所述標準品由5~20mg α-酮戊二酸和1mL蒸餾水組成。