[發(fā)明專利]磁微?；瘜W發(fā)光測定三碘甲狀腺原氨酸試劑盒及檢測方法

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• 申請日: 2022-07-12
• 公開（公告）號: CN114878840A
• 公開（公告）日: 2022-08-09
• 發(fā)明（設計）人: 沈于飛;劉奇;石云齊
• 申請（專利權）人: 昆明思安生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/78
• 分類號: G01N33/78;G01N33/543;G01N21/76
• 代理公司: 云南恒于知行知識產權代理有限公司 53225
• 代理人: 李寧

1.磁微?；瘜W發(fā)光測定三碘甲狀腺原氨酸試劑盒，其特征在于，包括鏈霉親和素包被的磁微粒試劑、生物素包被的三碘甲狀腺原氨酸抗體、堿性磷酸酶標記的3,5-二碘-L酪氨酸、三碘甲狀腺原氨酸校準品、三碘甲狀腺原氨酸質控品、全反式維甲酸。

2.根據(jù)權利要求1所述的磁微?；瘜W發(fā)光測定三碘甲狀腺原氨酸試劑盒，其特征在于，所述鏈霉親和素包被的磁微粒試劑的濃度為0.3～1.0mg/ml，磁微粒包被試劑緩沖液為含20mM～100 mM的Tris堿，0.01%～0.1%的Tween20，pH值為6.0～8.0。

3.根據(jù)權利要求1所述的磁微粒化學發(fā)光測定三碘甲狀腺原氨酸試劑盒，其特征在于，所述生物素包被的三碘甲狀腺原氨酸抗體為suflo-NHS-Lc-生物素和小鼠單克隆抗體的標記物，標記時使用DMF有機溶劑將生物素溶解為5～10mg/ml，取溶解后的生物素30ul加入0.5mg的三碘甲狀腺原氨酸抗體，室溫反應2h，用標記緩沖液1在PD-10層析柱上進行純化，即得T3抗體-生物素標記物，使用時用工作液進行1:100～1:2000倍稀釋，所述工作液包含20mM～100mM的嗎啉乙磺酸，0.3%～5%的重組人血清白蛋白；

所述標記緩沖液1由1.2～3.0g/L的磷酸氫二鈉、0.15～0.3g/L磷酸二氫鈉、150～300mM/L的氯化鈉、0.2～1g/L的氯化鉀組成，Ph7.0～9.5。

4.根據(jù)權利要求1所述的磁微粒化學發(fā)光測定三碘甲狀腺原氨酸試劑盒，其特征在于，所述堿性磷酸酶標記的3,5-二碘-L酪氨酸為堿性磷酸酶和3,5-二碘-L酪氨酸的標記物，使用時用工作緩沖液進行1:5000～1:15000倍稀釋，所述工作緩沖液包含20mM～100mM的嗎啉乙磺酸，0.3%～5%的重組人血清白蛋白，pH6.0～8.0。

5.根據(jù)權利要求4所述的磁微粒化學發(fā)光測定三碘甲狀腺原氨酸試劑盒，其特征在于，所述工作緩沖液中含有5～50mg的蛋白解離劑，所述蛋白解離劑選自ANS-鎂、水楊酸鈉中的一種或兩種。

6.根據(jù)權利要求1所述的磁微粒化學發(fā)光測定三碘甲狀腺原氨酸試劑盒，其特征在于，所述全反式維甲酸的濃度為0.2～0.4mg/ml，包含濃度為0.1～0.2mg/ml的γ-干擾素。

7.根據(jù)權利要求1所述的磁微?；瘜W發(fā)光測定三碘甲狀腺原氨酸試劑盒，其特征在于，所述三碘甲狀腺原氨酸校準品為包含5%～20%的去激素人血清，20mM～100 mM的磷酸鹽緩沖液，pH7.4。

8.根據(jù)權利要求1所述的磁微?；瘜W發(fā)光測定三碘甲狀腺原氨酸試劑盒，其特征在于，所述堿性磷酸酶標記的3,5-二碘-L酪氨酸通過如下工藝制備：

S1、取3,5-二碘-L酪氨酸溶解于二甲基亞砜（DMSO）中，加入(二（磺基琥珀酰亞胺）辛二酸酯)（BS3）,25℃條件下，反應30min；

S2、步驟S1反應結束后加入堿性磷酸酶和標記緩沖液2，混勻，4℃反應16h，加入1mol/L的甘氨酸溶液室溫靜置10～30min，用標記緩沖液3在PD-10層析柱純化，即得堿性磷酸酶標記的3,5-二碘-L酪氨酸溶液。

9.根據(jù)權利要求8所述的磁微粒化學發(fā)光測定三碘甲狀腺原氨酸試劑盒，其特征在于，S2中所述標記緩沖液2為0.1M的碳酸氫鈉緩沖液，pH 8.5～9.5，標記緩沖液3包括12～25ml/L的三乙醇胺、5～17g/L的氯化鈉、1M/L氯化鎂、0.1M/L氯化鋅pH 6.5～8.5。

10.根據(jù)權利要求1所述的磁微?；瘜W發(fā)光測定三碘甲狀腺原氨酸檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、取樣本30ul加入20ul的全反式維甲酸，混勻后，溫育15min；

S2、向步驟S1中的混合液加入生物素包被的T3抗體工作液50ul、鏈霉親和素包被的磁微粒工作液30ul到反應管中，混勻，37℃溫育10min；

S3、取堿性磷酸酶標記的3,5-二碘-L酪氨酸工作液50ul，加入步驟S2的混合液中，混勻，37℃溫育10min；

S4、清洗液清洗3次，每次300ul；

S5、加入140ul底物，混勻后測試。