[發明專利]一種基于疏水性基底結合偶氮反應的SERS檢測組胺的方法

在審

• 申請號: 202210798634.0
• 申請日: 2022-07-08
• 公開（公告）號: CN115290626A
• 公開（公告）日: 2022-11-04
• 發明（設計）人: 吳莉;茍麗晨;侯賢燈;李玲;魏思琪;田云飛
• 申請（專利權）人: 四川大學
• 主分類號: G01N21/65
• 分類號: G01N21/65;G01N1/28
• 代理公司: 成都信博專利代理有限責任公司 51200
• 代理人: 舒啟龍

一種基于疏水性基底結合偶氮反應的SERS檢測組胺的方法，鋁合金放入沸騰的Pr(NO₃)₃溶液中，反應結束后，放入硬脂酸乙醇溶液中浸泡，即得基于氧化鐠的鋁合金疏水性基底。偶氮偶合反應：在冰鹽浴條件下采用AMTA溶液(含0.12M HCl)和5％NaNO₂制備衍生化試劑，再加入組胺待測液和8％K₂CO₃溶液；取衍生化產物與β?環糊精修飾的銀納米粒子混合，組成混合液；取混合液滴至上述鋁合金疏水性基底表面，待溶劑蒸發后，SERS檢測固相沉積物即可。本發明具有靈敏度高，準確性好，重現性好，選擇性較好等特點。

技術領域

本發明屬于光譜分析技術領域，具體涉及一種基于氧化鐠的鋁合金疏水性基底結合偶氮偶合反應的表面增強拉曼光譜(Surface-enhanced Raman spectroscopy，SERS)技術檢測魚肉中組胺的方法。

背景技術

組胺由L-組氨酸脫羧酶催化L-組氨酸產生，多存在于海產品、發酵奶制品中，或者作為肥大細胞的分泌物存在于人體內。人體若過量攝入組胺或富含組胺的食物可能會導致頭痛、腹瀉。因此，迫切需要建立一種高靈敏、高選擇性的食品中組胺檢測方法。目前常用的組胺測定方法包括色譜法、色譜-質譜聯用法、電化學傳感、熒光法和酶聯免疫吸附測定法等。然而這些方法通常需要繁瑣的預處理，檢測耗時。例如，基于鄰苯二甲醛衍生的HPLC法，步驟復雜，對溫度的控制要求高。基于電化學法檢測可能會受到工作電位過高產生的信號干擾。酶聯免疫吸附法需要價格昂貴檢測試劑盒，檢測所需要的環境也較為苛刻。

SERS法快速，靈敏、無損、選擇性好，且可提供指紋信息。然而對于無SERS活性、SERS活性較低或與SERS基底相互作用力弱的目標分子(例如組胺)，直接SERS測定存在困難，則可通過衍生化方法將其轉化為拉曼活性更高的衍生化產物來進行間接測定。疏水性基底還可進一步增強SERS信號。非疏水性基底表面的液滴在揮發過程中液體有向外流動的趨勢，導致形成的固相沉積物處于比較分散的狀態。疏水性基底能抑制液滴在揮發過程中的擴散，并達到富集目標分子的目的，可以將目標分子控制在SERS熱點豐富的區域，從而增強SERS信號，進一步提高方法靈敏度。基于稀土氧化物(rare earth oxide，REO)的疏水性基底由于稀土氧化物獨特的電子結構抗腐蝕能力強，堅固，耐用。目前，已有基于氧化鉺、氧化鈰、氧化鑭、氧化釔、和氧化釤等稀土氧化物的疏水性基底報道，但基于REO的疏水性基底在SERS檢測中的應用還鮮有報道。

疏水性基底與衍生化反應在SERS分析中各有優勢，但是對于檢測復雜樣品體系中低濃度的目標分子仍有限制。

發明內容

為了解決上述問題，本發明的目的是提供一種靈敏度高、準確性好、重現性好、選擇性較好的基于氧化鐠的鋁合金疏水性基底結合偶氮偶合反應的SERS技術檢測魚肉中組胺的方法。

本發明通過以下技術方案實現：

1、β-CD-AgNPs的制備

在劇烈攪拌下回流β-CD水溶液(11.5mM,67mL)，依次快速加入3mL新制備的10mM銀氨溶液及3mL 50mmol葡萄糖水溶液，溶液5min內變為黃色。繼續沸騰30min后，自然冷卻并儲存于4℃備用。

2、基于氧化鐠的鋁合金疏水性基底的制備

2cm×2cm×2mm的7075鋁合金分別用無水乙醇和超純水超聲清洗3次，每次5min。將潔凈的7075鋁合金放入沸騰的60mL 1mM Pr(NO₃)₃溶液中，反應30min后取出。超純水沖洗3次后放入0.04M硬脂酸乙醇溶液(十八烷酸乙醇溶液)中室溫浸泡0.5h取出。無水乙醇沖洗3次后放入烘箱80℃固化1h。取出自然冷卻，室溫保存備用。

3、偶氮衍生化反應