[發明專利]一種透明質酸鈉雙相凝膠及其應用

在審

• 申請號: 202210726398.1
• 申請日: 2022-06-23
• 公開（公告）號: CN114874976A
• 公開（公告）日: 2022-08-09
• 發明（設計）人: 吳克良;陳子江
• 申請（專利權）人: 山東大學
• 主分類號: C12N5/073
• 分類號: C12N5/073;C08J3/24;C08J3/02;C08L5/08;C08K5/1515
• 代理公司: 廣州廣典知識產權代理事務所(普通合伙) 44365
• 代理人: 萬志香

本發明提供了一種透明質酸鈉雙相凝膠，所述透明質酸鈉雙相凝膠由交聯透明質酸鈉和游離透明質酸鈉構成。本發明還提供了所述透明質酸鈉雙相凝膠在無透明帶受精卵或胚胎的培養中的應用，以及一種哺乳動物無透明帶受精卵或胚胎的培養方法。本發明提供的透明質酸鈉雙相凝膠能有效維持無透明帶受精卵或胚胎發育潛能和穩定性，使無透明帶受精卵或胚胎能正常發育。所述培養方法具有操作上更加簡單、有效和便利的優點。

技術領域

本發明屬于胚胎培養技術領域，具體涉及一種透明質酸鈉雙相凝膠及其應用。

背景技術

卵細胞的發育在濾泡中進行，當第一層濾泡細胞層完全包被住卵細胞后，在卵細胞的外方開始形成非細胞的膜，稱為透明帶。受精卵在不斷的卵裂過程中，其發育潛能的維持需要確保卵裂球之間保持相互的聯系以及一定的空間結構。而透明帶在維持卵裂間相互聯系和空間結構中起著非常關鍵的作用。在輔助生殖技術實施過程中，會存在透明帶缺失或異常的現象；另外在體外操作過程中，透明帶結構也存在脫落的現象。缺乏透明帶的受精卵利用常規的胚胎培養方法，會導致細胞分裂后卵裂球平鋪生長，從而影響胚胎的后期發育潛能。

針對無透明帶胚胎，目前也有文獻報道使用懸滴法和瓊脂糖凝膠等方法進行培養獲得成功的案例。但在使用中均存在一定的缺陷：懸滴法操作比較復雜，而且培養液的量非常少，很難保證胚胎培養環境的穩定，故其最終所獲得的可用胚胎效率仍然較低；使用瓊脂糖或其他凝膠狀物質雖然可以在一定程度上起到維持胚胎發育空間結構的作用，但由于其本身不透氣性，并且強度很難控制，導致胚胎發育效果的穩定性較差，而且瓊脂糖等凝膠成分對胚胎發育以及后期著床方面的負面影響也很難評估。

因此，急需開發一種能有效維持無透明帶受精卵或胚胎發育潛能和穩定性的產品和培養方法。

發明內容

基于此，本發明的目的在于提供一種透明質酸鈉雙相凝膠，其能有效維持無透明帶受精卵或胚胎發育潛能和穩定性，使無透明帶受精卵或胚胎在培養過程中能正常發育。

具體技術方案如下。

一種透明質酸鈉雙相凝膠，所述透明質酸鈉雙相凝膠由交聯透明質酸鈉和游離透明質酸鈉構成。

在一些實施例中，所述透明質酸鈉雙相凝膠中交聯透明質酸鈉和游離透明質酸鈉的重量比為1：(1.2～6)。

在一些實施例中，所述透明質酸鈉雙相凝膠中交聯透明質酸鈉和游離透明質酸鈉的重量比為1：(1.2～4)。

在優選的實施例中，所述透明質酸鈉雙相凝膠中交聯透明質酸鈉和游離透明質酸鈉的重量比為1：(1.5～3.5)。

在更優選的實施例中，所述透明質酸鈉雙相凝膠中交聯透明質酸鈉和游離透明質酸鈉的重量比為1：(2～3.5)。

在一些實施例中，所述交聯透明質酸鈉由選自丁二醇縮水甘油醚、二乙烯基砜、雙磺基琥珀酰亞胺辛二酸酯、3,3′-二硫雙磺基琥珀酰亞胺丙酸酯、4,4′二硫雙磺基琥珀酰亞胺丁酸酯中的至少一種的交聯劑制備而成。

在優選的實施例中，所述交聯劑選自丁二醇縮水甘油醚。

本發明還提供了上述透明質酸鈉雙相凝膠在無透明帶受精卵或胚胎的培養中的應用。

本發明還提供了一種哺乳動物無透明帶受精卵或胚胎培養方法，包括以下步驟：(1)向培養皿中加入上述透明質酸鈉雙相凝膠，然后依次在所述透明質酸鈉雙相凝膠上面覆蓋培養液以及礦物油；(2)將所述培養皿置于培養箱中，使所述透明質酸鈉雙相凝膠的pH值與所述培養液的pH值相同；(3)取出所述培養皿，用拉細的胚胎轉移管將哺乳動物無透明帶受精卵或胚胎嵌入所述透明質酸鈉雙相凝膠中，然后將培養皿放入培養箱中繼續培養。

在一些實施例中，所述培養液選自胚胎培養液、受精液培養液、卵裂胚培養液、囊胚培養液、體外操作培養液中的至少一種。