[發(fā)明專利]一種猴痘病毒特異性融合蛋白抗原及其制備方法和應(yīng)用

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• 申請日: 2022-06-24
• 公開（公告）號: CN115043948A
• 公開（公告）日: 2022-09-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊帆;杜金芳;單金紅;李文;王婷;劉萬建;劉愛驊
• 申請（專利權(quán)）人: 青島碩景生物科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;C12N1/21;C07K16/08;C07K16/06;G01N33/569;A61K39/275;A61P31/20;C12R1/19
• 代理公司: 青島鼎丞智佳知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 37277
• 代理人: 吳春艷

本發(fā)明屬于生物工程領(lǐng)域，公開了一種猴痘病毒特異性融合蛋白抗原及其制備方法和應(yīng)用，所述猴痘病毒特異性融合蛋白抗原的氨基酸序列如Seq ID NO:1所示，上述猴痘病毒特異性融合蛋白抗原包括猴痘病毒B19R蛋白和B21R蛋白的2個(gè)優(yōu)勢線性抗原。本發(fā)明還提供了表達(dá)該融合蛋白抗原的重組工程菌，并提供了該猴痘病毒特異性融合蛋白抗原的制備方法，該方法制備得到的猴痘病毒特異性融合蛋白抗原具有較好的抗原性和特異性，可準(zhǔn)確區(qū)分猴痘和其他正痘病毒，可將其應(yīng)用于制備猴痘病毒檢測試劑盒、用于誘導(dǎo)針對猴痘病毒的免疫反應(yīng)的藥劑或用于預(yù)防猴痘病毒感染的藥劑等，為猴痘病毒的快速診斷和國內(nèi)猴痘病毒的疾病的防控提供了技術(shù)支持。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物工程領(lǐng)域，尤其涉及一種猴痘病毒特異性融合蛋白抗原及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

猴痘病毒亦稱猴天花，與天花病毒和牛痘病毒一樣同屬于正痘病毒，屬于一種人畜共患病的病毒，其發(fā)源與非洲熱帶雨林，根據(jù)該病毒的毒力的不同以及危害程度不同，將其分為中非和西非兩種病毒。猴痘病毒大小200-300nm，外周有30nm的外膜，內(nèi)核為勻質(zhì)的核心體，病毒可以獨(dú)立復(fù)制。

一直以來，天花病毒和猴痘病毒被認(rèn)為是兩個(gè)最具有潛在生物恐怖威脅的病原。天花病毒由于全世界大規(guī)模的安全和廉價(jià)疫苗的應(yīng)用，已經(jīng)在70-80年代在全球被根除。猴痘病毒在人與人之間傳播性差，致死率相對天花病毒較低，但是它的宿主群體廣泛(嚙齒動(dòng)物)，導(dǎo)致存在被基因修飾為更高毒株的危險(xiǎn)性，所以繼天花病毒之后猴痘病毒也成為重要的痘病毒傳染病。

隨著50年代初次發(fā)現(xiàn)猴痘病毒并命名，70-90年代也相繼出現(xiàn)人畜感染的報(bào)道，但是一直未引起人類的重視。研發(fā)一種猴痘快速檢測試劑盒以及檢測抗原的工作迫在眉睫。

盡管在宿主嗜性和毒力存在差異，但是正痘病毒在病毒形態(tài)、生命周期和結(jié)構(gòu)上表現(xiàn)出高度的相似性，蛋白組之間的同源性達(dá)到92-95％。因此，尋找一種能有效區(qū)分免疫天花病毒疫苗和猴痘病毒感染抗體的抗原顯得更為重要，是影響猴痘檢測準(zhǔn)確性的重要因素。

目前，臨床和科研過程中都需要針對猴痘病毒的建立特異性快速檢測方法。但是，對于該病的病原學(xué)診斷方法主要為核酸檢測試劑盒、臨床癥狀等方法，而核酸檢測試劑盒方法耗時(shí)長，臨床癥狀速度慢，均不利于快速診斷。而目前市面上，尚未有猴痘病毒特異性抗原和快速檢測方法。如何解決上述技術(shù)問題，是目前生物工程技術(shù)領(lǐng)域需要解決的技術(shù)問題。

發(fā)明內(nèi)容

針對上述問題，本發(fā)明提供了一種猴痘病毒特異性融合蛋白抗原、其編碼基因、以及該抗原的制備方法和應(yīng)用，該融合蛋白抗原的抗原性和特異性好，為猴痘病毒的快速診斷和這類疾病的防控提供了技術(shù)支持。

現(xiàn)有的猴痘病毒核酸檢測可根據(jù)同源基因序列內(nèi)的單核苷酸多態(tài)性的優(yōu)勢，區(qū)分猴痘病毒和其他痘病毒。但這種核酸檢測需要在病毒仍然存在的情況下收集標(biāo)本，在感染清除后樣品不能用于診斷猴痘。由于先前天花疫苗接種引起的交叉反應(yīng)性免疫反應(yīng)，猴痘標(biāo)準(zhǔn)抗體檢測的開發(fā)變得復(fù)雜。

考慮到過去的天花疫苗接種的抗牛痘IgM抗體應(yīng)該普遍不存在，所以對樣品進(jìn)行免疫球蛋白M(IgM)抗體檢測可以用于區(qū)分猴痘的感染。為解決本發(fā)明提出的上述技術(shù)問題，從患者血清中快速準(zhǔn)確檢測猴痘狀病毒IgM抗體顯得尤為重要。建立膠體金試紙條檢測新型冠狀病毒抗體，可有效反映個(gè)人的感染情況并做到及時(shí)監(jiān)控，而最基礎(chǔ)的是尋找一個(gè)猴痘病毒的特異性抗原。而病毒作為天然抗原，其存在風(fēng)險(xiǎn)性大、時(shí)效性不足的問題，因此需要研發(fā)出一種安全性高、特異性高、時(shí)效性高的重組抗原。

第一方面，為解決上述問題，本發(fā)明提供一種猴痘病毒特異性融合蛋白抗原，其特征在于，其氨基酸序列如Seq ID NO:1所示。