[發明專利]鐮刀菌及其發酵化合物在防治壞死樣凋亡相關疾病中的應用

在審

• 申請號: 202210721964.X
• 申請日: 2022-06-24
• 公開（公告）號: CN115074255A
• 公開（公告）日: 2022-09-20
• 發明（設計）人: 楊獻文;馬華彬;汪朝鳳;鄒正彪;徐琳;謝明敏;郝優佳
• 申請（專利權）人: 自然資源部第三海洋研究所
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P17/08;C07D313/00;A61K31/365;A61P25/00;A61P1/00;A61P29/00;A61P9/10;A61P1/18;A61P1/16;A61P31/12;A61P35/00;A61P25/28;A61P21/00
• 代理公司: 廣州晟策知識產權代理事務所(普通合伙) 44709
• 代理人: 王靜;鄭書鑫

本發明公開了鐮刀菌(Fusarium sp.)ZEN?48、利用其制備發酵化合物及其發酵化合物在制備防治壞死樣凋亡(necroptosis)相關疾病中的應用。鐮刀菌(Fusarium sp.)ZEN?48于2022年4月27日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC M 2022503；本發明鐮刀菌Fusarium sp.ZEN?48的發酵產物為大環內酯類化合物或其鹽，具有靶向性抑制TNFα誘導的壞死樣凋亡的作用，可用于制備抗壞死樣凋亡相關疾病的治療藥物。本發明對我國海洋藥物開發具有重要意義，對壞死樣凋亡相關的疾病治療和新藥開發具有重要意義。

技術領域

本發明涉及微生物、藥物化合物技術領域，具體涉及鐮刀菌ZEN-48、利用其制備發酵化合物及其發酵化合物在防治壞死樣凋亡相關疾病中的應用。

背景技術

壞死樣凋亡(Necroptosis)是一種非Caspase依賴的程序性細胞死亡，被認為與多種人類疾病有關，如神經退行性疾病和炎癥性疾病及病毒感染引發的相關疾病。壞死樣凋亡可由死亡受體、Toll樣受體、干擾素受體等激活誘導。在壞死樣凋亡中，有一個核心信號軸，RIPK1(受體相互作用蛋白激酶1)-RIPK3(受體相互作用蛋白激酶3)-MLKL(混合譜系激酶結構域樣假激酶)，并形成由RIPK1-RIPK3-MLKL組成的壞死小體，最終誘導MLKL的磷酸化和寡聚化，進而轉移到質膜并觸發膜溶解，導致細胞內容物完全釋放并促進炎癥。

大量的研究證實RIPK1是細胞凋亡和壞死以及炎癥通路中的一個關鍵調節因子。RIPK1逐漸成為神經退行性疾病、自身免疫性疾病和炎癥等多種疾病治療的有效靶點之一。目前，用于自身免疫性疾病的GSK′772、用于肌萎縮側索硬化癥(ALS)的DNL747等，正在臨床試驗中進行研究。但是，總的來說，對程序性壞死的研究以及相關靶點，包括RIPK1、RIPK3和MLKL的研究還處于初期。因此，具有選擇性、有效性和安全性的壞死樣凋亡小分子抑制劑有待于進一步的被發現和開發。

大環內酯類是一類以大環內酯環為特征并以可變側鏈/基團為特征的疏水化合物。大環內酯類藥物已被證明具有治療特性。事實上，一些廣為人知的抗生素化合物，包括紅霉素，是大環內酯類。除了抗生素特性外，大環內酯類還顯示出其他廣泛的藥理作用，如抗病毒、抗寄生蟲、抗真菌和免疫抑制作用等。因此，開發大環內酯類藥物在防治壞死樣凋亡疾病中應用是有必要的。

發明內容

本發明的目的在于提供一種鐮刀菌(Fusarium sp.)ZEN-48及其發酵化合物在制備壞死樣凋亡藥物中的應用。本發明提供的大環內酯類化合物為brefeldin A或其鹽，分離自鐮刀菌(Fusarium sp.)ZEN-48的發酵產物，其對TNFα誘導的壞死樣凋亡具有顯著的靶向抑制作用，對壞死樣凋亡相關的疾病治療和新藥開發具有重要意義。

本發明的第一方面，提供保藏編號為CCTCC M 2022503的鐮刀菌(Fusarium sp.)ZEN-48，保藏于中國典型培養物保藏中心。

本發明的第二方面，提供鐮刀菌(Fusarium sp.)ZEN-48在制備發酵化合物中的應用，所述發酵化合物為大環內酯類化合物或其鹽，其結構如式(I)所示：

本發明的第三方面，提供鐮刀菌(Fusarium sp.)ZEN-48的發酵化合物的制備方法，包括以下步驟：

S1、將保藏編號為CCTCC M 2022503的鐮刀菌(Fusarium sp.)ZEN-48進行發酵培養，得到發酵物；

S2、將步驟S1得到的發酵物用乙酸乙酯進行萃取，取有機萃取物進行層析，分別使用石油醚、二氯甲烷和甲醇進行洗脫，濃縮二氯甲烷層，得到粗提物；

S3、將步驟S2得到的粗提物用正相硅膠柱色譜進行分離，用二氯甲烷-甲醇體系進行梯度洗脫，依次得到3個粗餾分：Fr.1～Fr.3；