[發明專利]應用熔解曲線檢測MMACHC基因高頻突變的試劑盒

在審

• 申請號: 202210719458.7
• 申請日: 2022-06-23
• 公開（公告）號: CN114875134A
• 公開（公告）日: 2022-08-09
• 發明（設計）人: 趙燕;楊海寧;崔亞洲;韓金祥;鄒卉
• 申請（專利權）人: 山東第一醫科大學（山東省醫學科學院）
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 廣東科信啟帆知識產權代理事務所(普通合伙) 44710
• 代理人: 李波

1.一種用于檢測MMACHC基因高頻突變的引物對集，其特征在于，所述引物對集包括第一引物對集、第二引物對集和第三引物對集。

2.根據權利要求1所述的引物對集，其特征在于，所述第一引物對集用于檢測MMACHC基因的c.80A＞G、c.217C＞T、c.567dupT突變位點，包括第一上游引物和第一下游引物、第二上游引物和第二下游引物、第三上游引物和第三下游引物，核苷酸序列依次如SEQ IDNO.1-SEQ ID NO.6所示。

3.根據權利要求1所述的引物對集，其特征在于，所述第二引物對集用于檢測MMACHC基因的c.482G＞A、c.658_660delAAG突變位點，包括第四上游引物和第四下游引物、第五上游引物和第五下游引物，核苷酸序列依次如SEQ ID NO.7-SEQ ID NO.10所示。

4.根據權利要求1所述的引物對集，其特征在于，所述第三引物對集用于檢測MMACHC基因的c.609G＞A位點，包括第六上游引物和第六下游引物，核苷酸序列依次如SEQ IDNO.11-SEQ ID NO.12所示。

5.根據權利要求1-4任一項所述的引物對集，其特征在于，每條引物的Tm值獨立地為58～60℃；優選地，所述引物之間的Tm值差異在2℃內。

6.一種應用熔解曲線檢測MMACHC基因高頻突變的試劑盒，其特征在于，所述檢測試劑盒包括權利要求1-5任一項所述的引物對集。

7.根據權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒進一步包括擴增反應體系組分、質控品。

8.根據權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述擴增反應體系組分選自FastStartTaq DNA聚合酶、dNTPs、飽和染料、PCR擴增緩沖液、MgCl₂和水。

9.根據權利要求7所述的試劑盒，其特征在于，所述質控品包括空白質控品、陰性質控品；優選地，所述空白質控品為無酶水；所述陰性質控品為未突變的MMACHC基因質粒。

10.權利要求1-5所述的引物對集或權利要求6-9所述的試劑盒在制備MMACHC高頻突變檢測產品或裝置中的應用。