[發明專利]一種檢測雌激素受體α的單克隆抗體及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202210707134.1
• 申請日: 2022-06-21
• 公開（公告）號: CN114874326B
• 公開（公告）日: 2023-01-17
• 發明（設計）人: 胡旻;章月凱;陶娜娜
• 申請（專利權）人: 圖凌（杭州）生物醫藥有限公司
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;G01N33/577;G01N33/574
• 代理公司: 杭州信與義專利代理有限公司 33450
• 代理人: 萬景旺

本發明公開了一種用于檢測雌激素受體α的單克隆抗體及其制備方法和應用，屬于免疫檢測技術領域。本發明的用于檢測雌激素受體α的單克隆抗體利用SEQ ID NO:1所示的免疫原多肽免疫實驗兔得到，其重鏈可變區的CDR?H1、CDR?H2、CDR?H3序列和輕鏈可變區的CDR?L1、CDR?L2、CDR?L3序列分別如SEQ ID NO:5～10所示。利用本發明的用于檢測雌激素受體α的單克隆抗體對雌激素受體α進行檢測，特異性強、準確度高，對于臨床上乳腺癌的預測、診斷、用藥指導和預后具有非常大的臨床應用價值。

技術領域

本發明屬于免疫檢測技術領域，具體地，涉及一種檢測雌激素受體α的單克隆抗體及其制備方法和應用。

背景技術

乳腺癌在惡性腫瘤中的比例為23％，屬于常見的惡性腫瘤。乳腺癌的診斷、治療及預后與乳腺癌的組織病理學分期與雌激素受體α(Estrogen receptor-α，ER-α)和孕激素受體(Progesterone receptor，PR)的表達及表達程度有很大相關性，已知PR可以被ER-α誘導，并在ER-α蛋白的調控中發揮重要作用，因此，PR常作為ER-α功能的一項指標。ER-α和PR的表達情況與患者的內分泌治療效果相關。目前，ER-α、PR檢測廣泛應用于乳腺癌患者的預后判斷與指導用藥，因此，對ER-α和PR的準確檢測，是乳腺癌患者接受恰當治療的重要依據。

我國相關乳腺癌診治指南已將ER-α、PR的免疫組織化學檢測列為乳腺癌患者的常規檢測項目，并用于指導患者的內分泌治療。ER-α和PR抗體試劑及檢測試劑盒是利用免疫組織化學法，對病理組織切片中雌激素受體或孕激素受體進行檢測的試劑。此類試劑為特異性單克隆或多克隆抗體，或抗體與顯色系統、對照試劑、質控片(如有)及其它輔助試劑一同包裝成試劑盒形式的檢測試劑，用于乳腺癌患者的預后判斷、指導用藥及對其它腫瘤的鑒別診斷。

然而，由于抗體試劑的特異性和親和力不足，目前ER-α、PR檢測在不同臨床檢測機構之間、不同檢測試劑之間存在測定結果差異，甚至檢測結果中存在一定比例的假陽性和假陰性結果。

發明內容

為了解決上述技術問題中的至少一個，本發明采取的技術方案如下：

本發明第一方面提供一種用于檢測雌激素受體α(ER-α)的單克隆抗體的制備方法，包括以下步驟：

S1，獲得雌激素受體α的免疫原多肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；

S2，將所述免疫原多肽與血藍蛋白交聯，與免疫佐劑混合后注射實驗兔進行免疫；

S3，取實驗兔抗凝血分離外周血單核細胞，使用生物素標記并篩選外周血單核細胞中的B細胞，獲取表達抗雌激素受體α抗體的B細胞遺傳信息進行擴增重組，載入載體后轉染載體細胞，載體細胞培養分泌的抗體經過純化后獲得所述單克隆抗體。

在本發明的一些實施方案中，步驟S2中，將所述免疫原多肽與血藍蛋白(KeyholeLimpet Hemocyanin，KLH)交聯后，利用PBS緩沖液稀釋至0.5～2mg/mL。

在本發明的一些實施方案中，步驟S2中，所述免疫佐劑為弗氏完全佐劑或弗氏不完全佐劑。

在本發明的一些實施方案中，步驟S2中，共免疫4次。進一步地，首次免疫使用弗氏完全佐劑，后續免疫使用弗氏不完全佐劑，如此能夠獲得更好的免疫效果。

在本發明的一些實施方案中，步驟S3中，所述篩選外周血單核細胞中的B細胞是指篩選血清滴度滿足要求的B細胞。

本發明的第二方面提供利用本發明第一方面任一所述的制備方法得到的用于檢測雌激素受體α的單克隆抗體。

在本發明的一些實施方案中，所述用于檢測雌激素受體α的單克隆抗體的重鏈可變區的CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3序列和輕鏈可變區的CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3序列分別如SEQID NO:5～10所示。