[發明專利]用于蛋白質雙向電泳中等電聚焦質控的熒光多肽及其制備方法

有效

• 申請號: 202210701517.8
• 申請日: 2022-06-20
• 公開（公告）號: CN115010789B
• 公開（公告）日: 2023-10-20
• 發明（設計）人: 陳秋燕;豆敏華
• 申請（專利權）人: 湖州申科生物技術股份有限公司
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;G01N27/447
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 崔佳佳;徐迅

本發明提供了用于等電聚焦質控的內參多肽。所述多肽是如式(1)所示的多肽：F?L?aa₁?aa₂?aa₃?aa₄?aa₅?aa₆?aa₇?aa₈(1)；或者式(1)所示多肽的具有相同功能的多肽衍生物。本發明的內參多肽的分子量低、用量少，能夠保證雙向電泳數據結果的重復性。

技術領域

本發明屬于檢測領域。更具體地，本發明涉及應用于蛋白質雙向電泳中等電聚焦質控的熒光多肽及其制備方法。

背景技術

1975年，意大利生化學家O'Farrell發明雙向電泳技術，主要是利用蛋白質的帶電性和分子量大小的差異，通過等電聚焦電泳和SDS-PAGE電泳達到分離蛋白質組的技術。該技術中的等電聚焦電泳主要依據蛋白質或其它兩性分子等電點的不同，在一個穩定的、連續的pH梯度中進行分離和分析。

等電聚焦電泳基本原理可分為兩個部分，第一步構建電場，在一電解池中加入載體兩性電解質，當通過直流電時，載體就根據各自等電點的不同而移動，并逐漸形成一個由陽極到陰極pH值逐漸增加的pH梯度。第二步分離蛋白質：由于蛋白質分子所帶電荷量都取決于所處環境的pH值，在環境的pH值高于其pI值處帶負電，反之則帶正電，帶正負電荷的蛋白分別向其等電點處泳動，直至其等電點處電荷消失而停止，達到平衡，等電點相近的蛋白聚集，形成一個很窄的區帶，使不同等電點的樣品相互分離。

等電聚焦電泳具有分辨率高(0.01pH單位)、抵消擴散的作用、濃縮低濃度樣本等優點，不僅可以用來分離兩性大分子，還可以通過測定等電點來鑒定蛋白質。

目前，在雙向電泳的研究中，聚焦時間與膠條的長度、兩性電解載體、樣品基質中的離子濃度、IPG膠條水化狀態、膠條泡漲等因素均會影響樣品等電聚焦結果。而對于聚焦結果的檢測，一般通過第二向電泳結束，SDS-PAGE膠染色后獲知。雖然可以在等電聚焦的過程中對電流進行監測，但無法直接驗證樣品中蛋白的聚焦完全度。與此同時，即使通過對膠條進行銀染或考馬斯染色等方式進行結果的驗證，但膠條無法繼續進行第二向SDS-PAGE電泳。而市面上的等電聚焦標準品，往往用蛋白質分子，存在分子量大，使用時需要單獨進行電泳的缺陷，無法做為真正的內參。如果與樣品一起進行電泳，則會殘留于SDS-PAGE膠中，對結果存在一定干擾。

因此，本領域急需一種能夠與樣品一起進行電泳，從而能夠真正作為等電聚焦電泳的內參的標準品。

發明內容

本發明的目的在于提供一種用于等電聚焦質控的內參多肽，所述內參多肽的分子量足夠小，從而能夠與樣品一起進行電泳，同時不影響樣品的等電聚焦，進而保證了雙向電泳數據結果的重復性。

在第一方面，本發明提供一種用于等電聚焦質控的內參多肽，所述多肽是：

1)如下式(1)所示的多肽：

F-L-aa₁-aa₂-aa₃-aa₄-aa₅-aa₆-aa₇-aa₈(1)

式(1)中，

F為熒光基團；

L為任選的連接分子；

aa₁獨立選自：E、K、D、R、Q、N；

aa₂獨立選自：E、D；

aa₃獨立選自：I、K、L、V、M、A、F、R、Q、N；

aa₄獨立選自：R、K、Q、N、R、N；