[發明專利]基于人血清蛋白的復合熒光探針及其制備方法和在檢測赭曲霉毒素A中的應用

有效

• 申請號: 202210680502.8
• 申請日: 2022-06-16
• 公開（公告）號: CN114836200B
• 公開（公告）日: 2023-05-05
• 發明（設計）人: 曾華金;楊冉;屈凌波;段雅靜;孫遠強;李朝輝
• 申請（專利權）人: 鄭州大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;C09K11/02;C09K11/06
• 代理公司: 鄭州優盾知識產權代理有限公司 41125
• 代理人: 冉珊敏

本發明屬于毒素檢測領域，涉及赭曲霉毒素A的快速檢測，特別是指基于人血清蛋白（HSA）的復合熒光探針及其制備方法和在檢測赭曲霉毒素A中的應用。所述復合熒光探針為和人血清蛋白復合得到。該探針制備簡單、價格低廉，可以特異性識別OTA，與OTA反應靈敏，8?min即可達到反應平衡，操作簡單，有望在食品中OTA快檢領域推廣應用。

技術領域

本發明屬于毒素檢測領域，涉及赭曲霉毒素A的快速檢測，特別是指基于人血清蛋白（HSA）的復合熒光探針及其制備方法和在檢測赭曲霉毒素A中的應用。

背景技術

OTA是一種由青霉菌屬和曲霉菌屬的菌種產生的次級代謝產物，廣泛存在于谷物、豆類、葡萄酒、咖啡等食品中。OTA可對神經系統、免疫系統、生殖系統、肝臟、腎臟等造成不可逆損傷，國際癌癥研究機構（IARC）將其列為2B類致癌物質，嚴重威脅著人類及動物的身體健康。準確快速的檢測食品中OTA的含量對控制食品品質具有重要意義。目前，常用的OTA的檢測方法有高效液相-質譜法、薄層色譜法、氣相色譜法、電化學法、酶聯免疫法、固相微萃取法等，這些方法都可以實現OTA的檢測，但一般需要大型專用儀器、專業的操作人員、繁瑣的檢測步驟，并且檢測成本較高，很難實現OTA的快速檢測。熒光檢測法因其選擇性好、靈敏度高、簡便快速等優點備受研究者的關注。目前報道的通過熒光法檢測OTA的方法一般需要借助酶聯反應，但酶聯反應法存在抗原、抗體價格高，易失活等問題，因此開發低成本，性質穩定，易于操作的新型熒光快檢方法尤為重要。

發明內容

本發明提出一種基于人血清蛋白的復合熒光探針及其制備方法和在檢測赭曲霉毒素A中的應用，該探針制備簡單、價格低廉，可以特異性識別OTA，與OTA反應靈敏，8?min即可達到反應平衡，操作簡單，有望在食品中OTA快檢領域推廣應用。

本發明的技術方案是這樣實現的：

基于人血清蛋白的復合熒光探針，所述復合熒光探針為和人血清蛋白復合得到。

上述的復合熒光探針的制備方法，步驟為：

（1）取原料和HSA；將溶于DMSO溶液中得到2?mM的儲備液，將HSA溶于高純水中得到1?mM的儲備液；

（2）將的儲備液和HSA的儲備液加入磷酸鹽緩沖液中，混合后濃度為5?μM，HAS濃度為5μM，室溫下反應10?min，得到復合熒光探針。

磷酸鹽緩沖液中反應物和人血清蛋白的物質的量比為1:1。

上述的復合熒光探針在檢測赭曲霉毒素A中的應用。

步驟為：

（1）分別向復合熒光探針溶液中加入不同濃度的赭曲霉毒素A的標準溶液，反應8min，以454?nm的光源激發，測定不同濃度的標準溶液對應的熒光發射強度，制作標準曲線；

（2）再向復合熒光探針溶液中加入待測溶液，反應完全后在454?nm的光源激發下，測定其對應的熒光發射強度；

（3）將步驟（2）的熒光發射強度代入步驟（1）的標準曲線中，即得待測溶液中赭曲霉毒素A的定量濃度。

進一步，所述步驟（1）中復合熒光探針溶液為5?μM的溶液與5μM的人血清蛋白溶液等物質的量比混合得到；不同濃度的標準溶液對應的熒光發射強度為在589?nm處測得的熒光發射強度。

進一步，所述步驟（1）中標準曲線為y?=?165.76x?+?894.59，其中R²=0.9888。

進一步，所述步驟（2）中反應時間為8?min。

上述的應用檢測對象為食品。

本發明具有以下有益效果：