[發(fā)明專利]一種用于檢測雞肉摻假的試劑盒及檢測方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202210616039.0 | 申請日： | 2022-05-31 |
| 公開（公告）號： | CN114752691A | 公開（公告）日： | 2022-07-15 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 藍航鎮(zhèn);徐好儀;潘道東;吳振 | 申請（專利權(quán)）人： | 寧波大學(xué) |
| 主分類號： | C12Q1/6888 | 分類號： | C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11;G01N33/558;G01N33/58 |
| 代理公司： | 寧波誠源專利事務(wù)所有限公司 33102 | 代理人： | 王瑩;袁翊朦 |
| 地址： | 315211 浙*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 用于 檢測 雞肉 摻假 試劑盒 方法 | ||
本發(fā)明公開了一種用于檢測雞肉摻假的試劑盒，包括用于擴增雞Cytb基因的正向引物PF2和反向引物PR2，具有檢測成本低、操作簡單、特異性好、靈敏度高、可視化程度高的優(yōu)點。本發(fā)明還公開一種應(yīng)用有用于檢測雞肉摻假試劑盒的檢測方法，同樣具有檢測成本低、操作簡單、特異性好、靈敏度高、可視化程度高的優(yōu)點，可以用于肉制品中雞源性成分摻假的檢測。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及雞肉摻假檢測領(lǐng)域，具體涉及一種用于檢測雞肉摻假的試劑盒及檢測方法。
背景技術(shù)
肉類產(chǎn)品不僅是人們餐桌上的重要組成部分，也是人體的重要營養(yǎng)來源。隨著人民生活水平以及生活質(zhì)量的日益提高，人們對于食品安全問題也越來越重視。許多無良商家在高成本的牛羊肉中摻入成本較低的雞肉等以獲取高額利益，這一現(xiàn)象給消費者和相關(guān)食品安全監(jiān)督部門造成了嚴重的困擾。因此為了維護消費者的合法權(quán)益，保護消費者的生命健康，維持市場經(jīng)濟可持續(xù)發(fā)展，我們需要研發(fā)出一種簡單、低成本、特異性高的肉制品摻假現(xiàn)場檢測方法。
肉制品作為最具摻假風(fēng)險的食品之一，其檢測手段主要是基于蛋白質(zhì)水平和核酸水平。蛋白質(zhì)水平的檢測方法主要包括酶聯(lián)免疫法、光譜、質(zhì)譜、色譜和蛋白電泳等。但蛋白質(zhì)不穩(wěn)定容易在預(yù)處理和加工過程中變性，導(dǎo)致實驗結(jié)果重復(fù)性差且靈敏度低。核酸擴增是分子生物學(xué)研究中一個重要的工具，其極高的穩(wěn)定性和擴增能力完美的克服了蛋白質(zhì)分析的局限性，使其更適合于鑒定摻假的肉類產(chǎn)品。常用的基于核酸的摻假檢測方法包括聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)、實時熒光PCR、數(shù)字PCR、交叉引物擴增(CPA)、循環(huán)介導(dǎo)的等溫擴增(LAMP)和重組酶聚合酶擴增(RPA)。PCR被認為是鑒定摻假肉制品的黃金標(biāo)準(zhǔn)，并已成功用于鑒定牛肉、羊肉、豬肉和雞肉。
而PCR擴增產(chǎn)物的分析技術(shù)，例如瓊脂糖凝膠電泳法，需要配置凝膠電泳儀而成本較高、操作相對比較復(fù)雜、檢測時間相對較長，又如熒光定量PCR技術(shù)需要昂貴的儀器而成本較高、操作相對復(fù)雜、檢測時間相對較長。
因此，可繼續(xù)改進。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的第一個技術(shù)問題是針對現(xiàn)有技術(shù)的現(xiàn)狀，提供一種成本較低、操作簡單方便、檢測時間較短的用于檢測雞肉摻假的試劑盒。
本發(fā)明所要解決的第一個技術(shù)問題是針對現(xiàn)有技術(shù)的現(xiàn)狀，提供一種應(yīng)用有上述的用于檢測雞肉摻假試劑盒的檢測方法。
本發(fā)明解決上述第一個技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為：一種用于檢測雞肉摻假試劑盒，其特征在于：包括用于擴增雞Cytb基因的正向引物PF2和反向引物PR2，
正向引物PF2：5’-Biotin-CATGACCCAAATCCTCACCG-3’；
反向引物PR2：5’-Fam-TCCTTGAAGGTAGGACCGTA-3’。
膠體金試紙的結(jié)構(gòu)具體是，所述試劑盒還包括膠體金試紙，該膠體金試紙包括PVC背板、設(shè)置在PVC背板上且依次沿樣品流動方向從下往上分布且依次部分重疊的樣品墊、金標(biāo)墊、硝酸纖維素膜、吸水墊；
所述金標(biāo)墊上標(biāo)記有膠體金顆粒和膠體金蛋白的復(fù)合物；
所述硝酸纖維素膜上沿樣品流動方向分別標(biāo)記有兔抗Fam抗體的檢測線T線、標(biāo)記有BSA-Biotin的質(zhì)控線C線。
本發(fā)明解決上述第二個技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為：一種應(yīng)用有如上述的用于檢測雞肉摻假試劑盒的檢測方法，其特征在于：包括
步驟S1、提取待檢測樣品的DNA，并采用所述正向引物PF2和反向引物PR2進行PCR擴增；
步驟S2、制備膠體金試紙；
步驟S3、將所述步驟S1擴增后的PCR產(chǎn)物滴在膠體金試紙上，將膠體金試紙的樣品墊進入展開液中，等待至少5min后觀察；
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