[發明專利]氨基化動物源聚糖酶法接枝多肽的制備方法及應用

在審

• 申請號: 202210595452.3
• 申請日: 2022-05-29
• 公開（公告）號: CN114891845A
• 公開（公告）日: 2022-08-12
• 發明（設計）人: 黃代勇;徐曙光;黃云琦;盧曉會;劉志格
• 申請（專利權）人: 武漢東方天琪生物工程有限公司
• 主分類號: C12P19/26
• 分類號: C12P19/26;C12P19/14;C12P21/00;C08B37/08
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本發明公開了精氨酸偶聯不同分子量動物源聚糖與多肽合成共聚物的制備方法及應用，屬于現代聲化技術、酶分子機器技術、超濾技術三者集成的生物醫藥領域。首先是應用聲化技術輔助精氨酸實現氨解，使精氨酸偶聯不同分子量動物源聚糖，其次是仍在超聲波空化傳質作用輔助下，應用微生物來源的MTGase作為生物催化劑，經體外酶促合成，在精氨酸偶聯不同分子量動物源聚糖的氨基上與多肽合成共聚，形成一類新化合物集群。動物源聚糖包括但不限于殼聚糖(CS)、低分子量肝素(LMWH)、低分子量透明質酸(HA)等，多肽指動物源蝦殼多肽。這些產品是抗血栓、抗凝血、抗癌癥及增強人體免疫力等生物創新藥的苗頭物或先導物。

技術領域

本發明涉及現代化工技術和酶分子機器技術集成的生物醫藥領域，公開了一種精氨酸偶聯動物源聚糖接枝多肽的制備方法及應用。更確切地說是應用超聲波聲化傳質輔助精氨酸偶聯動物源聚糖，再與多肽混合，經MTGase酶促合成，形成一類新的化合物集群。

背景技術

多(聚)糖按原料分為植物源，動物源，微生物源。一般地，聚糖比多糖的分子量要小，本發明以聚糖指稱多糖。自然界中除了植物源聚糖占比最大外，其次就是動物源聚糖了。動物源聚糖存在和分布極為廣泛，幾乎存在于所有動物組織器官中(沈鳴等，2001.11,氨基多糖的藥理研究進展)。動物源聚糖中能被充分利用的目前主要有甲殼質(殼聚糖)、肝素、透明質酸和硫酸軟骨素4種(陳大勇等，2013.6，動物源多糖的藥理活性研究進展)。

中國從1958年開始研究甲殼素和殼聚糖，并用幾丁質(甲殼素)在醫學上搞出人造皮膚，引起轟動，以后就停止不前。20世紀1980年代，新的甲殼質產品在美國和日本出現,并且多種類型的殼聚糖已經進入社會應用。20世紀1990年代后是中國研究甲殼素和殼聚糖的全盛時期(張文博等，甲殼素殼聚糖的提取及其應用研究新進展，2008,2月)。2000年來，酶法生產殼寡糖的方法被攻克(胡志鵬,殼寡糖的研究進展,2003.4月；黃代勇等，一種酶法降解殼聚糖生產殼寡糖的方法,中國專利：CN101240305.B，2007.9月)。

由于殼聚糖分子上的C2位有1個H₂N基，所以它是宇宙中唯一帶正電荷的陽性食物纖維。大量國外醫學文獻報告：殼聚糖具有抑制癌細胞轉移，提高人體免疫力的作用。尤其適用于糖尿病、肝腎病、高血壓、肥胖等癥(何德慶,幾丁聚糖的生物活性，2013,7)。

2010年來，殼聚糖的研究從3條線上展開，一是借助精氨酸的胍基和多個H₂N基，使其偶聯殼聚糖以增強殼聚糖的正電性(張勝明等，2009.8,中國專利：CN101624427A,一種高取代度精氨酸-殼聚糖及其制備方法和應用)，二是用殼聚糖接枝多肽，以增強其生理功能(鄒勝瓊,2017.5,羥丙基殼聚糖接枝多肽的制備及性能研究)，三是應用殼聚糖改性某些特殊物質，將其作為一種藥物載體，可實現靶向輸送，提高藥物的療效(羅華麗等,2006.7 月,殼聚糖作為藥物緩釋載體的研究進展)。從以上分析可知，動物源多糖中的殼聚糖接枝蛋白多肽為深入挖掘殼聚糖的藥學功能展示了美好前景。

肝素也屬于動物源聚糖。肝素是一種由艾杜糖醛酸和葡萄糖醛酸二糖重復單位組成的酸性黏多糖，分子量5～30kDa。肝素通過和抗凝血酶的結合產生抗凝血功能，己應用于各種心腦血管疾病，如心絞痛、高血壓、動脈硬化、急性腦梗死等。但肝素口服不吸收，主要在肝臟代謝，給患者帶來諸多不便。與肝素相比，肝素裂解后形成的低分子量肝素 (LMWH，4～6.5kDa)生物利用度高，半衰期長，應用面更大(葛又新等，2001.12，低分子量肝素的性質與應用)。但目前低分子量肝素氨基化后與寡肽經生物接枝的低分子肝素寡肽(LMWH-OPP)還未見文獻報道。