[發(fā)明專利]一種微量超長度低突變核苷酸合成方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210592840.6
• 申請(qǐng)日: 2022-05-27
• 公開（公告）號(hào): CN114875021A
• 公開（公告）日: 2022-08-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 喻明軍;王維坤;崔康樂;駱曉文;陳健
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 通用生物（安徽）股份有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/10
• 分類號(hào): C12N15/10
• 代理公司: 合肥正則元起專利代理事務(wù)所(普通合伙) 34160
• 代理人: 胡玉

1.一種微量超長度低突變核苷酸合成方法，其特征在于：包括以下步驟：

步驟一、合成儀檢查和準(zhǔn)備；

步驟二、按照以下配方配置合成試劑：

(1)活化劑：0.25M Pyridine；

(2)單體：單體質(zhì)量：溶解液體積＝1:30；

(3)帶帽A：30％Acetic Anhydride in ACN；

(4)帶帽B：0.04M DMAP in ACN；

(5)氧化劑：0.025M I₂-2.5wt％NMI-12.5wt％H₂O-85wt％THF；

(6)脫帽劑：3.5％TFA in DCM；

步驟三、編制合成程序試劑反應(yīng)順序和步驟；

步驟四、合成Frits合成板：安裝好合成板、蓋好儀器蓋板，點(diǎn)擊運(yùn)行合成儀，自動(dòng)合成，最后下機(jī)，即可。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種微量超長度低突變核苷酸合成方法，其特征在于：步驟一中將合成儀中A板、B板進(jìn)行獨(dú)立管路排廢。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種微量超長度低突變核苷酸合成方法，其特征在于：所述合成儀中A板、B板獨(dú)立管路排廢的方式為在A板、B板排廢管路上安裝壓力觸發(fā)式單向閥門，在壓力高于6psi單向開啟，低于6psi時(shí)雙向關(guān)閉。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種微量超長度低突變核苷酸合成方法，其特征在于：步驟二中活化劑中含水量≤20ppm；單體中含水量≤10ppm，溶解乙腈為HPLC級(jí)別；帶帽A中含水量≤20ppm；帶帽B中含水量≤20ppm；脫帽劑中含水量≤30ppm。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種微量超長度低突變核苷酸合成方法，其特征在于：步驟三中合成程序試劑反應(yīng)順序和步驟具體按照下表進(jìn)行：

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種微量超長度低突變核苷酸合成方法，其特征在于：Oligo≤110bp，CPG選用1000A。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種微量超長度低突變核苷酸合成方法，其特征在于：Oligo＞110bp，CPG選用2000A。