[發明專利]一種非洲豬瘟病毒間接ELISA抗體檢測方法、試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 202210592515.X
• 申請日: 2022-05-27
• 公開（公告）號: CN115032387A
• 公開（公告）日: 2022-09-09
• 發明（設計）人: 魏建超;馬志永;楊揚;李昱昊;張妍;管志欣;張俊杰;鄭家楊;邱亞峰;李宗杰;李蓓蓓;劉珂;邵東華
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院上海獸醫研究所
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/543;C07K14/11;C07K1/22;C12N15/34;C12N15/70;C12N15/66
• 代理公司: 臺州浙粵壟專利代理事務所(普通合伙) 33419
• 代理人: 王洪臣

本發明屬于生物檢測技術領域，涉及一種非洲豬瘟病毒間接ELISA抗體檢測方法、試劑盒及其應用。本發明所建立的非洲豬瘟病毒間接ELISA抗體檢測方法，其是通過原核表達制備ASFV重組pB602L蛋白，并以ASFV?B602L蛋白作為待檢抗原，建立ASFV間接ELISA抗體檢測方法，為ASFV的檢測和疾病的特異性診斷提供實驗依據，獲得特異性好，敏感性高的抗體診斷試劑盒。本發明制備的重組ASFV pB602L蛋白具有良好抗原性，建立的間接ELISA抗體檢測方法具有靈敏、特異、高效的特點，適合于ASFV抗體的現場檢測。

技術領域

本發明屬于生物檢測技術領域，涉及一種非洲豬瘟病毒間接ELISA抗體檢測方法、試劑盒及其應用。

背景技術

非洲豬瘟(African swine fever，ASF)是一種由非洲豬瘟病毒(African swinefever virus， ASFV)引起的豬病毒性疾病，主要導致家豬和野豬發生急性、熱性和高度接觸性傳染病。鑒于非洲豬瘟的嚴重性，世界動物衛生組織(OIE)已將其列為法定動物疫病，在我國也是一級動物傳染病。家豬急性感染非洲豬瘟可導致100％的死亡率。世界衛生組織(OIE)已將ASF列為法定報告的動物疾病。該病毒已在全球范圍內傳播。該病毒的某些特征與虹彩病毒科和痘病毒相似。

ASFV是非洲豬瘟病毒科(Asfarviridae)的唯一成員，該病毒的某些特征與虹彩病毒科和痘病毒相似，也是蟲媒病毒DNA病毒。電鏡檢測結果顯示，ASFV的形狀為二十面體，直徑約260nm。病毒顆粒的結構比較復雜，由內向外由五層組成：核仁、核殼、內包膜、衣殼和外包膜。ASFV是一種大型包膜病毒，具有二十面體形態，平均直徑為200nm。病毒基因組由單分子線性、共價封閉端雙鏈DNA組成。不同分離株的基因組長度在170到190 kbp之間，目前研究得到的基因組大小的顯著差異主要是由于多基因家族(MGF)的基因拷貝的增加或丟失以及ASFV基因組非編碼區串聯重復序列數量的變化。ASFV編碼151到 167個開放閱讀框，編碼170多種蛋白質，目前ASFV大多數蛋白的結構功能還有待研究。

非洲豬瘟具有復雜的流行病學特征。受感染的家豬、野豬、軟蜱、受污染的飼料(包括原料和泔水)、水、精液、豬肉、人員、車輛和工具是ASFV的主要傳染源。此外，螫蠅、水蛭和其他吸血昆蟲也可能是ASFV感染的來源。傳染源長期攜帶病毒，是非洲豬瘟防控的難點之一。由于非洲豬瘟病毒分離株的毒力、感染途徑和劑量以及宿主特征，這使感染 ASFV的豬只顯示出不同的臨床表現和病理損害。ASFV毒株通常分為高毒力、中等毒力和低毒力。高毒力的強毒株通常導致該病的最急性型(豬在感染后1-4天死亡)和急性型(豬在感染后3-8天死亡)，而中等毒性菌株與急性型(豬在感染后11-15天死亡)和亞急性型 (豬在感染20天后死亡)感染有關，慢性型與中低毒力分離株的感染有關。

基于以上，快速、靈敏以及可現場部署的ASFV檢測對于疾病監測和控制非常重要。目前用于早期診斷ASF的方法包括免疫印跡試驗、抗原間接酶聯免疫吸附(ELISA)、聚合酶鏈式反應(PCR)試驗、巢式PCR檢測、PCR檢測、實時熒光定量PCR、交叉引發擴增(CPA)分析、聚合酶交聯螺旋反應(PCLSR)分析和環介導等溫擴增(LAMP)測定。其中，間接ELISA可用于ASFV感染豬樣本的抗體檢測。間接ELISA方法具有特異性好、靈敏度高以及操作方便的特點，適用于大批樣品的檢測。這些重組抗原的獲得方式相對簡單，與從感染細胞中獲取抗原相比，在生產過程中無需使用病毒，增加了安全性且在抗原生產過程中更易標準化。

發明內容