[發明專利]用于診斷纖維化疾病的試劑盒、方法和計算機可讀介質

在審

• 申請號: 202210560691.5
• 申請日: 2022-05-23
• 公開（公告）號: CN115166242A
• 公開（公告）日: 2022-10-11
• 發明（設計）人: 蘇金;李軍旗;楊鵬輝;肖云鵬;魏新茹
• 申請（專利權）人: 菲創生物醫學技術（廣州）有限公司
• 主分類號: G01N33/573
• 分類號: G01N33/573;G01N33/577;G01N33/58;G01N33/68
• 代理公司: 廣州文冠倪律知識產權代理事務所(普通合伙) 44348
• 代理人: 何錦標;張玉穎

本發明公開了來自對象的外泌體在制備用于診斷所述對象的纖維化疾病的試劑盒中的應用，其中所述外泌體表達的成纖維細胞激活蛋白（FAP）的水平高于未患疾病的對照的水平表示所述對象患有纖維化疾病。本發明還公開了用于診斷纖維化疾病的試劑盒、方法和計算機可讀介質。本發明通過檢測外泌體中的FAP來高效、準確地診斷纖維化疾病。

技術領域

本發明涉及用于診斷纖維化疾病的試劑盒、方法和計算機可讀介質，更具體地，涉及通過檢測外泌體中的FAP來診斷纖維化疾病。

背景技術

纖維化是許多疾病的病理特征，是由于人體修復受損組織的天然能力發生功能異常而引起的。纖維化可發生在身體中的許多器官的許多組織中。如果不及時治療，纖維化會導致重要器官的瘢痕形成，從而造成不可挽回的損害并最終導致器官衰竭。纖維化組織重塑也可影響癌癥轉移且于移植受者中加速慢性移植排斥反應。然而，盡管其對人類健康影響巨大，且已有尼達尼布和吡非尼酮獲批用于治療纖維化疾病（例如IPF），但是臨床數據顯示其僅可以緩解患者癥狀（諸如肺功能等），不能顯著延長患者生存期。

間質性肺疾病（Interstitial lung disease，ILD）是一類異質性病癥，伴隨著導致肺實質損傷的不同程度的炎癥和纖維化。ILD并不是一種獨立的疾病，它包括200多個病種。其臨床上主要表現為漸進性勞力性氣促、限制性通氣功能障礙伴彌散功能降低、低氧血癥、影像學上的雙肺彌漫性病變，最終發展為彌漫性肺纖維化和蜂窩肺，導致呼吸功能衰竭而死亡。

特發性肺纖維化（Idiopathic pulmonary fibrosis，IPF）是不能確認明顯病因（特發性）的間質性肺病，是最常見的ILD類型。IPF死亡率非常高，診斷后中值生存期為3-5年，并且報告的5年生存率低于30％，與最致命的癌癥相當。直到最近，除了肺移植之外，很少有治療選擇被證明是有效的，并且用于大多數患者的治療是癥狀控制和姑息護理。

肺纖維化的發病機制還沒有完全清楚，并且就診的患者多處于疾病的中晚期，治療效果不佳，嚴重影響患者的生命質量。纖維化的治療效果很大程度上取決于是否可以早期診斷。

然而，目前臨床上對纖維化疾病的診斷尤其是早期診斷仍然面臨很多挑戰。盡管器官穿刺活檢能夠提供很大的診斷幫助，但活檢本身也存在一定缺陷。間質性肺疾病的診斷方法亦非常有限，主要依賴于胸部高分辨CT及肺功能檢查，肺活檢由于創傷性大，在臨床應用存在局限。

因此，亟需開發無創且高效、準確的診斷方法，以輔助穿刺活檢及高分辨率CT用于纖維化疾病（特別是間質性肺病）的診斷。

成纖維細胞激活蛋白（Fibroblast activation protein，FAP）是一種膜絲氨酸蛋白酶，具有二肽基肽酶及膠原酶兩種活性，能降解二肽及Ⅰ型膠原。FAP條件性地表達于90%以上的上皮惡性腫瘤的基質成纖維細胞表面，包括乳腺癌、卵巢癌、肺癌、結直腸癌、胃癌、胰腺癌、皮膚黑色素瘤等。FAP不但在腫瘤內存在，在一些基質活化的疾病中也有表達，如創面愈合、瘢痕組織、骨關節炎、類風濕關節炎，以及慢性炎癥如肉芽組織、肝纖維化、肺纖維化、肝硬化等，但在人體正常組織中一般無表達。FAP具有特殊的生物學特性，其基因組穩定、豐富、特異地表達于FAP相關疾病的發生發展過程中。鑒于其在腫瘤中的廣泛表達及重要作用，FAP已成為腫瘤顯像和治療的重要靶點。

FAP主要存在于癌癥、慢性炎癥和纖維化病變的活化成纖維細胞中。因此，與健康受試者相比，預期疾病患者的外周血中游離FAP水平會更高。然而，有研究發現，來自常規腺癌患者的血漿樣本中的可溶性（sFAP）水平低于對照組；對幾種癌癥的大量研究表明，與癌癥狀態相關的sFAP水平同樣出人意料地降低；健康受試者中較高的水平表明腫瘤組織可能不會產生sFAP。也有研究發現，血漿中循環FAP（cFAP）的水平與類風濕性關節炎或系統性硬化癥均不相關，并且與炎癥標志物呈負相關。還有研究發現，血漿FAPα與腫瘤中表達的FAPα無關，食管鱗狀細胞癌（ESCC）患者血漿FAPα水平降低，FAPα陽性細胞分泌可溶性FAPα的能力非常有限。