[發明專利]ApoA5基因敲除倉鼠模型的構建方法在審
| 申請號： | 202210545600.0 | 申請日： | 2022-05-19 |
| 公開（公告）號： | CN114703230A | 公開（公告）日： | 2022-07-05 |
| 發明（設計）人： | 冼勛德;王宇輝;黃薇;張玲 | 申請（專利權）人： | 北京大學 |
| 主分類號： | C12N15/85 | 分類號： | C12N15/85;C12N15/89;C12N15/113;C12N15/12;A01K67/027 |
| 代理公司： | 北京箐昱專利代理事務所(普通合伙) 16105 | 代理人： | 彭毅 |
| 地址： | 100080*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | apoa5 基因 倉鼠 模型 構建 方法 | ||
1.ApoA5基因敲除倉鼠模型的構建方法，其特征在于，包括以下步驟：
步驟一、設計倉鼠ApoA5基因特異性打靶序列，制備cas9 mRNA和sgRNA；
步驟二、收集和培養倉鼠受精卵；
步驟三、顯微注射：將所述sgRNA和cas9 mRNA共同注射至倉鼠受精卵的細胞質中；
步驟四、將顯微注射后的受精卵植入代孕倉鼠體內，F0代倉鼠出生。
2.根據權利要求1所述的ApoA5基因敲除倉鼠模型的構建方法，其特征在于，在步驟一中，ApoA5基因特異性打靶序列為：GCAACCACTCAGGCGCGGAA。
3.根據權利要求1或2所述的ApoA5基因敲除倉鼠模型的構建方法，其特征在于，在步驟二中，交配17-20小時后取卵。
4.根據權利要求3所述的ApoA5基因敲除倉鼠模型的構建方法，其特征在于，在步驟二中，使用M2培養基作為取卵操作培養基。
5.根據權利要求4所述的ApoA5基因敲除倉鼠模型的構建方法，其特征在于，在步驟二中，受精卵培養采用HECM-10培養基，并在37℃，5％CO2環境下培養。
6.根據權利要求1或2所述的ApoA5基因敲除倉鼠模型的構建方法，其特征在于，在步驟三中，通過T7啟動子將設計的模板轉錄成sgRNA和Cas9一起進行顯微注射。
7.根據權利要求6所述的ApoA5基因敲除倉鼠模型的構建方法，其特征在于，在步驟三中，原核注射片段為sgRNA和Cas9-mRNA。
8.根據權利要求1或2所述的ApoA5基因敲除倉鼠模型的構建方法，其特征在于，在步驟四中，代孕鼠麻醉后，打開腹腔找出卵巢輸卵管，每只代孕鼠植入30枚注射后受精卵，通過輸卵管傘口，吹入輸卵管，縫合蘇醒后，正常飼養。
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