[發(fā)明專利]一種用于檢測鰤諾卡氏菌的RPA引物、探針以及檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210535699.6
• 申請日: 2022-05-18
• 公開（公告）號: CN114634990B
• 公開（公告）日: 2022-09-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 譚愛萍;涂傳明;鄧玉婷;趙飛;黃志斌
• 申請（專利權(quán)）人: 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院珠江水產(chǎn)研究所;廣州奕昕生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/365
• 代理公司: 廣州專理知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 44493
• 代理人: 張鳳

1.一種用于檢測鰤諾卡氏菌的RPA檢測組合，其特征在于，所述檢測組合包括RPA引物和探針；

所述RPA引物F和R的核酸序列分別如序列表SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示：

引物F：5’-CGCGGATGTGGGCCACAACGTCGAACGCCT-3’；

引物R：5’-GGAACCCGTGAAAATGCGAGTGATCAGTGG-3’；

所述探針根據(jù)所述的RPA引物設(shè)計得到，所述探針的大小為30~45bp，其5’端用FAM標(biāo)記，3’端進(jìn)行C3 Spacer修飾，且在探針中間距離5’端30bp處進(jìn)行THF修飾；

所述探針的核酸序列如序列表SEQ ID NO.3所示：

探針P：5’-FAM-AGATTGCGAATCGCCAAGTGCTCGTCCGCA[FAM-dT][THF][BHQ-dT]CGAACGGGGTCGTAG(C3 Spacer)-3’。

2.一種基于RPA法檢測鰤諾卡氏菌的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括如權(quán)利要求1所述的用于檢測鰤諾卡氏菌的RPA檢測組合。

3.一種非疾病診斷的基于RPA法檢測鰤諾卡氏菌的方法，其特征在于，包括如下步驟：

1）提取待測樣品中的DNA；

2）以步驟1）所提取的DNA為擴(kuò)增模板，采用如權(quán)利要求1所述的引物F和R、探針P在RPA反應(yīng)管中進(jìn)行RPA擴(kuò)增反應(yīng)；

3）分析RPA擴(kuò)增反應(yīng)得到的產(chǎn)物。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的非疾病診斷的基于RPA法檢測鰤諾卡氏菌的方法，其特征在于，步驟2）所述RPA擴(kuò)增反應(yīng)的條件為：95℃，30秒，40℃，30秒，40個循環(huán)，95℃，1分鐘終止反應(yīng)。