[發明專利]調節端粒酶限速蛋白運動的多肽探針及其復合物和方法

有效

• 申請號: 202210526465.5
• 申請日: 2022-05-16
• 公開（公告）號: CN114920802B
• 公開（公告）日: 2023-05-23
• 發明（設計）人: 婁筱叮;夏帆;吳霞
• 申請（專利權）人: 中國地質大學（武漢）
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C07K1/107;C12N9/12;C07K19/00;C12N15/113;A61K41/00;A61K31/7088;A61K47/64;A61P35/00
• 代理公司: 武漢藍寶石專利代理事務所(特殊普通合伙) 42242
• 代理人: 方菲

本發明提供一種調節端粒酶限速蛋白運動的多肽探針及其復合物和應用方法。本發明設計了PKK?TTP多肽探針和PKK?TTP/hs多肽探針復合物，其中PKK?TTP在白光的刺激下(PKK?TTP+L)可促進細胞核內的端粒酶限速蛋白轉移到細胞質中；PKK?TTP/hs復合物可將hs攜帶到癌細胞中抑制細胞質中hTERT蛋白的表達，切斷細胞核中的hTERT蛋白來源；此外，在白光的刺激下，PKK?TTP/hs復合物(PKK?TTP/hs+L)不僅能將hs成功遞送到細胞中，減少細胞核內的hTERT蛋白，還能促進hTERT蛋白從細胞核移出進入細胞質；本發明中提供的兩種復合物在不同的應用場景中均能夠有效減少細胞核中的hTERT蛋白含量，從而達到抑制腫瘤細胞增殖的技術效果。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種調節端粒酶限速蛋白運動的多肽探針及其復合物及方法。

背景技術

細胞核是細胞遺傳和代謝活動的控制中心。核膜是一種將細胞核完全包覆的雙層膜，提供了一個細胞內區室化的環境，使很多生物學過程在核內發生。核質穿梭是一個重要的生物學過程，可以將信號從細胞質傳遞到細胞核，調控細胞行為。其中，端粒酶是在細胞核中發揮活性作用的一種核糖核蛋白復合體，通過以自身RNA為模板，催化合成單鏈TTAGGG重復序列于端粒的3'端，以維持端粒長度。人端粒酶由核糖核酸模板、逆轉錄酶催化組分(hTERT蛋白)和其他相關蛋白組成。其中，逆轉錄蛋白是端粒酶活性的主要限速蛋白，催化端粒酶的逆轉錄酶活性。

在正常人體組織中，端粒酶的活性被抑制。但是，在約85％的癌細胞中，端粒酶被重新激活，使腫瘤細胞能夠在細胞分裂中維持端粒長度，實現永生化。研究發現：逆轉錄蛋白與癌細胞中的端粒酶活性呈正相關關系。端粒酶陽性的癌細胞中人類端粒酶逆轉錄酶(hTERT)下調會導致腫瘤細胞生長停滯。因此，逆轉錄蛋白可作為利用端粒酶靶向治療癌細胞的又一研究目標。

發明內容

基于此，有必要提供一種可調節端粒酶限速蛋白運動的多肽探針復合物及應用方法，能夠降低細胞核中hTERT蛋白含量，抑制細胞核內的端粒酶活性，達到防止癌細胞增殖的目的。

本發明采用如下技術方案：

本發明在于提供一種在細胞質中調節端粒酶限速蛋白運動的多肽探針，主要由可經光誘導產生ROS的物質與PKKKRKVKAARRRRRRRR正炔基肽(PKK)反應而成。

具體地，本發明提供一種調節端粒酶限速蛋白運動的多肽探針PKK-TTP，其結構如下式所示：

該PKK-TTP的制備方法包括：采用TTP和序列為PKKKRKVKAARRRRRRRRRRpra的多肽PKK，置于含DMSO和水的混合溶劑體系中，加入抗壞血酸鈉鹽和溴化亞銅，惰性氣氛下反應，純化，即得。在其中一些實施例中，優選地，TTP和多肽PKK的反應摩爾比為2:1。

本發明還提供一種調節端粒酶限速蛋白運動的多肽探針復合物，所述多肽探針復合物由可經光誘導產生ROS的物質與PKKKRKVKAARRRRRRRR正炔基肽(PKK)偶聯后合成多肽探針、再負載hTERT蛋白的小干擾RNA即可形成復合物。

優選地，PKK-TTP/hs由PKK-TTP與hTERT?siRNA反應制備而成的PKK-TTP/hs復合物。其制備方法包括：按照上述方法制備PKK-TTP，再將PKK-TTP與hTERT?siRNA孵育反應形成，即得。在其中一些實施例中，PKK-TTP與hTERT?siRNA的摩爾比為40:1。

本發明還提供上述調節端粒酶限速蛋白運動的多肽探針復合物、PKK-TTP、PKK-TTP/hs在制備降低細胞核內端粒酶限速蛋白含量的產品中的應用。采用PKK-TTP和/或PKK-TTP/hs降低細胞核內端粒酶限速蛋白含量時，需要采用白光刺激。

與現有技術相比，本發明的有益效果是：