[發明專利]一種雜交瘤細胞株8D3、單克隆抗體及其應用

有效

• 申請號: 202210519043.5
• 申請日: 2022-05-12
• 公開（公告）號: CN114752569B
• 公開（公告）日: 2023-07-14
• 發明（設計）人: 李炎鑫;劉全國;史喜菊;徐立偉;侯穎
• 申請（專利權）人: 中國海關科學技術研究中心
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/08;G01N33/577;G01N33/569;C12R1/91
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 吳波

本發明提供了一種雜交瘤細胞株8D3、單克隆抗體及其應用，屬于阮病毒檢測技術領域。本發明所述雜交瘤細胞株8D3保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCCNo.45105。本發明所述雜交瘤細胞株8D3能高效穩定的分泌單克隆抗體，分泌獲得的單克隆抗體特異性好，不僅能特異性識別朊病毒蛋白，還能區分瘋牛病和羊癢病病原體。

技術領域

本發明屬于阮病毒檢測技術領域，尤其涉及一種雜交瘤細胞株8D3、單克隆抗體及其應用。

背景技術

朊病毒是動物和人類傳染性海綿狀腦病的病原。由于正常PrP(PrP^c)轉變為致病PrP(PrPSc)，從而引發了一系列神經系統退行性疾病，根據其具有傳染性，并根據其共同的神經病理變化，將其命名為“可傳播性海綿狀腦病”，也稱為朊病毒病。朊病毒病的共同特征是均可引起致死性中樞神經系統的慢性退化性疾病，其典型病理學特點包括神經元死亡、空泡樣變性、膠質細胞和星狀細胞增生、PrPSc(朊病毒的異常形式)蓄積及淀粉樣斑塊形成，腦部和中樞神經出現很多空洞，呈海綿狀改變，病變通常兩側對稱。臨床癥狀主要表現為癡呆或知覺過敏、共濟失調、震顫等中樞神經癥狀，如羊癢病、瘋牛病。該潛伏期長，數月至數年，甚至數十年不等，但一旦出現臨床癥狀病程將迅速加快，在幾周到幾個月內死亡，致死率達100％。

目前，現行歐盟經過評估的TSE診斷方法是同一種方法，是檢測腦組織中的PrPsc，既可以用來檢測牛，也可以用來檢測羊，如果牛腦檢測為陽性則判斷為瘋牛病，如果羊腦檢測的為陽性則判斷為羊癢病，但不能區分瘋牛病和羊癢病。因此，急需一種可用于診斷朊病毒病、并能區分瘋牛病和羊癢病病原的單克隆抗體。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種雜交瘤細胞株8D3，能夠分泌特異性識別朊病毒蛋白的單克隆抗體，可用于由朊病毒引起的瘋牛病羊癢病，并區分瘋牛病和羊癢病病原體。

為了實現上述發明目的，本發明提供了以下技術方案：

一種雜交瘤細胞株8D3，所述雜交瘤細胞株8D3保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CGMCC?No.45105。

優選的，所述雜交瘤細胞株8D3以OvPrP(89-104aa)-KLH多肽偶聯物為免疫原，采用雜交瘤細胞融合技術獲得所述雜交瘤細胞株8D3。

優選的，所述OvPrP(89-104aa)-KLH多肽偶聯物由羊PrP多肽和載體蛋白keyholelimpet?hemocyanin偶聯而成。

本發明還提供了一種單克隆抗體，所述單克隆抗體由上述的雜交瘤細胞株8D3分泌產生。

優選的，所述單克隆抗體的腹水效價為1:10⁵。

優選的，所述單克隆抗體特異性識別朊病毒蛋白。

本發明還提供了上述雜交瘤細胞株8D3和/或單克隆抗體在制備檢測朊病毒病產品中的應用。

優選的，所述朊病毒病包括瘋牛病和/或羊癢病。

本發明還提供了上述雜交瘤細胞株8D3和/或單克隆抗體在制備區分瘋牛病和羊癢病病原體產品中的應用。

優選的，所述區分瘋牛病和羊癢病病原體的方法包括：將感染組織用蛋白酶K處理后，經過電泳、轉印，得到單克隆抗體后，進行免疫學檢測，該單抗8D3只與癢病PrP^sc反應，而不與瘋牛病PrP^sc反應。

本發明具有如下有益效果：

本發明雜交瘤細胞株8D3能高效穩定的分泌單克隆抗體，分泌獲得的單克隆抗體特異性好，不僅能特異性識別朊病毒蛋白，還能區分瘋牛病和羊癢病病原體。

保藏說明