[發(fā)明專利]抗S-腺苷同型半胱氨酸單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210515653.8
• 申請(qǐng)日: 2022-05-12
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN114891752B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-06-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 匡華;昂貝君;胥傳來(lái);徐麗廣;孫茂忠;吳曉玲;劉麗強(qiáng);馬偉;朱建平;郝昌龍;宋珊珊;胡擁明;吳愛(ài)紅;郭玲玲;胥欣欣
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N5/20
• 分類號(hào): C12N5/20;C12N15/02;C07K1/02;C07K16/44;G01N33/577;G01N33/68;G01N33/53
• 代理公司: 蘇州市中南偉業(yè)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 32257
• 代理人: 楊慧林

本發(fā)明涉及一株分泌抗S?腺苷同型半胱氨酸單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株及應(yīng)用，屬于免疫學(xué)疾病診斷技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明所述的雜交瘤細(xì)胞株于2022年03月03日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏地址為北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，保藏編號(hào)為CGMCCNo.45110，分類命名為單克隆細(xì)胞株。本發(fā)明提供的雜交瘤細(xì)胞株分泌的S?腺苷同型半胱氨酸單克隆抗體對(duì)SAH具有較好的靈敏度(ICsubgt;50/subgt;值為2.9nmol/L)和特異性(對(duì)類似物的交叉反應(yīng)率小于1％)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)人體血清中SAH含量的高敏檢測(cè)，為人體內(nèi)SAH含量的免疫學(xué)檢測(cè)提供了原料，能起到對(duì)心腦血管疾病有效監(jiān)控的作用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及免疫學(xué)疾病診斷技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一株分泌抗S-腺苷同型半胱氨酸單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株及應(yīng)用。

背景技術(shù)

S-腺苷同型半胱氨酸(S-adenosyl?homocysteine，SAH)，又稱S-腺苷高半胱氨酸。人體中的甲硫氨酸在代謝過(guò)程中首先與ATP在腺苷轉(zhuǎn)移酶的作用下生成S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosyl?methionine，SAM)，SAM在甲基轉(zhuǎn)移酶的催化作用下脫甲基，生成S-腺苷同型SAH。SAH又是同型半胱氨酸(Hcy)的重要前體物質(zhì)，能夠被SAH水解酶(S-adenosylhomocysteine?hydrolase，SAHH)可逆水解為Hcy和腺苷。已有研究表明，SAH含量的升高能夠誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞出現(xiàn)損傷，該機(jī)制與抑制DNA的甲基化過(guò)程有關(guān)。血漿SAH水平可以作為冠狀動(dòng)脈造影患者心血管疾病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的重要預(yù)測(cè)指標(biāo)。且有研究證實(shí)SAH作為缺血性腦卒中篩查敏感性指標(biāo)及治療靶點(diǎn)的可行性。

目前S-腺苷同型半胱氨酸含量的主要檢測(cè)方法有高效液相色譜(HPLC)方法，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)方法及熒光偏振免疫檢測(cè)(FPLA)方法等。這些檢測(cè)方法均涉及復(fù)雜的儀器設(shè)備，且需要專業(yè)的操作，步驟繁瑣耗時(shí)，難以實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)。基于免疫學(xué)原理的檢測(cè)方法，如酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)、側(cè)流免疫層析(LFIA)試紙條方法，具有方法及操作簡(jiǎn)單，省時(shí)省力，可以現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)目標(biāo)物的特點(diǎn)。上述免疫學(xué)方法以抗原抗體為原料，檢測(cè)待檢樣品中的目的抗原，因此制備出靈敏度高，特異性強(qiáng)的單克隆抗體是關(guān)鍵。目前SAH的免疫學(xué)檢測(cè)方法較少，市場(chǎng)上已有的單克隆抗體IC₅₀約為2400nmol/L，且對(duì)SAM有一定交叉，難以達(dá)到高靈敏、高特異檢測(cè)的要求。

發(fā)明內(nèi)容

為此，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題在于克服現(xiàn)有技術(shù)中SAH的免疫學(xué)檢測(cè)靈敏度低、特異性差的問(wèn)題。

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供了一株抗S-腺苷同型半胱氨酸單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株及應(yīng)用。本發(fā)明通過(guò)將制備的S-腺苷同型半胱氨酸完全抗原免疫動(dòng)物，經(jīng)過(guò)細(xì)胞融合、HAT選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)、ic-ELISA測(cè)細(xì)胞上清篩選細(xì)胞、亞克隆等步驟，最終得到了對(duì)S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)有較高靈敏度和特異性的單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株。

本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一株分泌抗S-腺苷同型半胱氨酸單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，所述雜交瘤細(xì)胞株于2022年03月03日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏地址為北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，保藏編號(hào)為CGMCC?No.45110，本發(fā)明所得的雜交瘤細(xì)胞株屬于單克隆細(xì)胞株。

本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一株分泌抗S-腺苷同型半胱氨酸單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株的制備方法，包括以下步驟，

(1)使用S-腺苷同型半胱氨酸半抗原制備S-腺苷同型半胱氨酸完全抗原，將獲得的S-腺苷同型半胱氨酸完全抗原制備成含抗原弗氏完全佐劑與含抗原弗氏不完全佐劑；

(2)對(duì)免疫動(dòng)物進(jìn)行首次免疫、加強(qiáng)免疫和沖刺免疫，首次免疫采用步驟(1)中所述含抗原弗氏完全佐劑，加強(qiáng)免疫采用步驟(1)中所述含抗原弗氏不完全佐劑，沖刺免疫采用步驟(1)中所述S-腺苷同型半胱氨酸完全抗原；