[發(fā)明專利]一種孤獨(dú)癥腸菌移植有效性的體外評(píng)價(jià)方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210507756.X
• 申請(qǐng)日: 2022-05-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN115011674A
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-09-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張家樹(shù)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京富瑪特生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6851
• 分類號(hào): C12Q1/6851;C12Q1/6869;C12Q1/6883;C12Q1/689;C12Q1/06;C12R1/01;C12R1/145
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1.一種孤獨(dú)癥腸菌移植有效性的體外評(píng)價(jià)方法；其特征在于包括以下步驟：

(1)健康供體初篩：采集健康供體和孤獨(dú)癥患者糞便樣品通過(guò)宏基因組或16SrRNA測(cè)序檢測(cè)供體(D)和受體(R)樣品多樣性香濃指數(shù)Sd、Sr和其特征菌原始豐度值D、R；其特征在于健康供體初篩指標(biāo)應(yīng)滿足(a)多樣性香濃指數(shù)Sd大于3；(b)普雷沃氏菌屬(Prevotella)、雙歧桿菌屬(Bifidobacter)、布勞特菌屬(Blautia)原始豐度D/R＞1和脫硫弧菌屬(Desulfovibrio)、梭菌屬(Clostridium)、薩特菌屬(Sutterella)原始豐度D/R＜1；

(2)受體腸菌體外準(zhǔn)備：將新鮮受體糞便樣品添加萬(wàn)古霉素、聚乙二醇、菊粉、黃連素中至少一種，在氧濃度為0-5％條件下處理4-24h，獲得清腸預(yù)處理受體腸菌；

(3)供體、受體體外預(yù)配型：將步驟(1)檢測(cè)獲得的合格供體糞便樣品按照重量百分比10％至40％移植接種到步驟(2)清腸預(yù)處理的受體腸菌中，并加3倍重量比的MG液體培養(yǎng)基混勻；供、受體混合菌液在氧濃度為0-5％條件下培養(yǎng)48h，獲得供、受體腸菌重組培養(yǎng)液；通過(guò)宏基因組或16SrRNA測(cè)序檢測(cè)，確定重組培養(yǎng)液的多樣性香濃指數(shù)St和孤獨(dú)癥特征菌群培養(yǎng)豐度終值T；

(4)移植方案有效性評(píng)價(jià)：通過(guò)正交試驗(yàn)篩選有效移植的供體和受體組合及受體體外準(zhǔn)備方案，有效移植判斷指標(biāo)為重組培養(yǎng)液的微生物組成滿足：(a)香濃多樣性指數(shù)St/Sr＞1；(c)普雷沃氏菌屬豐度T/R＞1、雙歧桿菌屬豐度T/R＞1、布勞特菌屬豐度T/R＞1和脫硫弧菌屬豐度T/R＜1、梭菌屬豐度T/R＜1、薩特菌屬豐度T/R＜1中的至少三項(xiàng)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的孤獨(dú)癥腸菌移植有效性的體外評(píng)價(jià)方法，其特征在于步驟(4)所述有效移植判斷指標(biāo)還包括重組培養(yǎng)液微生物組成滿足普雷沃氏菌屬/脫硫弧菌屬豐度T的比值顯著高于受體樣品原始豐度R的比值。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的孤獨(dú)癥腸菌移植有效性的體外評(píng)價(jià)方法，所述孤獨(dú)癥特征菌豐度檢測(cè)還可以采用疊氮溴化丙錠交聯(lián)結(jié)合種屬特異性16SrDNA熒光定量PCR方法進(jìn)行活菌數(shù)絕對(duì)定量。