[發(fā)明專利]用于快速檢測貓瘟病毒的試劑或試劑盒、其應(yīng)用及檢測方法

在審

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• 申請日: 2022-05-07
• 公開（公告）號: CN114959111A
• 公開（公告）日: 2022-08-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 馬嬌龍;王志宇;梅亞軍;李興翠;樊俊;陳紅干;姚忻岑;陸世達(dá);陳梁
• 申請（專利權(quán)）人: 英科新創(chuàng)（蘇州）生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12Q1/6806;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 蘇州所術(shù)專利商標(biāo)代理事務(wù)所(普通合伙) 32473
• 代理人: 孫兵

1.一種用于快速檢測貓瘟病毒的試劑或試劑盒，其特征在于，包括引物探針組，所述引物探針組針對VP2基因，包括上游引物FPVF、下游引物FPVR以及探針FPVP，所述FPVF、FPVR和FPVP的序列分別如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示。

2.如權(quán)利要求1所述的試劑或試劑盒，其特征在于，還包括用于檢測貓管家基因的管家基因引物探針組，所述管家基因引物探針組包括上游引物IF、下游引物IR以及探針I(yè)P，所述IF、IR和IP的序列分別如SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示。

3.如權(quán)利要求2所述的試劑或試劑盒，其特征在于，所述引物FPVP和IP的5’端標(biāo)記有熒光基團(tuán)，所述引物FPVP和IP的3’端標(biāo)記有淬滅基團(tuán)；所述FPVP和IP分別標(biāo)記不同的熒光基團(tuán)。

4.如權(quán)利要求3所述的試劑或試劑盒，其特征在于，所述熒光基團(tuán)選自HEX、FAM、TET、CF532、JOE、TAMRA、ROX、CY3、CY5、Texas Red、NED、Alexa Flour或VIC中的至少一種；和/或，所述淬滅基團(tuán)選自MGB、TAMRA、BHQ1、BHQ2、BHQ3或QSY4中的至少一種。

5.如權(quán)利要求1至4中任一項所述的試劑或試劑盒，其特征在于，還包括核酸釋放劑，所述核酸釋放劑包括10-500mM HEPES，1-100mM氯化鉀,5-50mM氨基三乙酸，0.1-3.5mM 3-[3-(膽酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸內(nèi)鹽，0.01-1M氫氧化鈉或氫氧化鉀，1-50mM三聚磷酸鈉、0.2-30mM十二烷基苯磺酸鈉，1-50mM乙二胺四乙酸二鈉溶液。

6.權(quán)利要求1至5中任一項所述的試劑或試劑盒在制備檢測貓瘟病毒的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

7.一種不以疾病診斷治療為目的的貓瘟病毒的檢測方法，其特征在于，采用如權(quán)利要求1至5中任一項所述的試劑或試劑盒對待測樣本進(jìn)行快速熒光PCR擴(kuò)增，再對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行檢測判斷。

8.如權(quán)利要求7所述的檢測方法，其特征在于，在對所述待測樣本進(jìn)行快速熒光PCR擴(kuò)增前，還包括將所述待測樣本置于核酸釋放劑中，混勻靜置；其中，所述核酸釋放劑包括10-500mM HEPES，1-100mM氯化鉀,5-50mM氨基三乙酸，0.1-3.5mM 3-[3-(膽酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸內(nèi)鹽，0.01-1M氫氧化鈉或氫氧化鉀，1-50mM三聚磷酸鈉、0.2-30mM十二烷基苯磺酸鈉，1-50mM乙二胺四乙酸二鈉溶液。

9.如權(quán)利要求7所述的檢測方法，其特征在于，所述快速熒光PCR擴(kuò)增的反應(yīng)程序條件為：預(yù)變性反應(yīng)：92-98℃反應(yīng)1-5min；擴(kuò)增反應(yīng)：92-98℃ 1-15s，55-60℃ 5s-25s，30-45cycles。

10.如權(quán)利要求7所述的檢測方法，其特征在于，所述檢測判斷的標(biāo)準(zhǔn)為：如果FPV通道有明顯擴(kuò)增曲線，則判定為陽性；如果FPV通道沒有擴(kuò)增曲線則判定為陰性。