[發明專利]一種酶標板用封閉液及其在TPO-Ab酶免疫檢測中的應用

在審

• 申請號: 202210482977.6
• 申請日: 2022-05-05
• 公開（公告）號: CN114924072A
• 公開（公告）日: 2022-08-19
• 發明（設計）人: 冷毅斌;楊飛;張念元
• 申請（專利權）人: 伊萊瑞特（武漢）生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/573
• 分類號: G01N33/573;G01N33/543;G01N33/53
• 代理公司: 武漢世躍專利代理事務所(普通合伙) 42273
• 代理人: 倪婭

本發明公開了一種酶標板用封閉液及其在TPO?Ab酶免疫檢測中的應用，該封閉液中含有ZIF?70且其含量為0.02～0.18g/L。該封閉液用于TPO?Ab酶免疫檢測中，能顯著提高檢測信號強度和酶標板的穩定性，即使在50℃的高溫下也能穩定保存3個月以上，而且容易配制、成本低，便于工業化生產。

技術領域

本發明涉及酶聯免疫技術領域，具體涉及一種高穩定性的酶標板用封閉液及其在抗甲狀腺過氧化物酶抗體(TPO-Ab)的免疫檢測中的應用。

背景技術

甲狀腺過氧化物酶(TPO)是甲狀腺微粒體的主要抗原成分，其功能與甲狀腺素的合成有關。抗甲狀腺過氧化物酶抗體(TPO-Ab)或抗甲狀腺微粒體抗體(TMA)可能使甲狀腺細胞損傷。檢測抗甲狀腺過氧化物酶抗體的方法與抗甲狀腺球蛋白抗體類似，測定抗甲狀腺過氧化物酶抗體的臨床意義與抗甲狀腺球蛋白抗體也大致相同，主要對于慢性淋巴細胞性甲狀腺炎、甲狀腺功能亢進癥、原發性甲狀腺功能減退癥，有輔助診斷、療效考核價值。TPO-Ab與自身免疫性甲狀腺疾病(AITD)的發生、發展密切相關，可通過細胞介導和抗體依賴的細胞毒作用使甲狀腺激素分泌不足造成自身免疫相關的甲減，作為自身免疫性甲狀腺疾病的診斷和監測指標，TPO-Ab比TMA具有更好的靈敏度、特異性、更可靠和有意義，已成為診斷甲狀腺自身免疫性疾病的首選指標。TPOA的主要臨床應用：診斷橋本氏病(HD)和自身免疫性甲亢；毒性彌慢性甲狀腺腫(Graves)；監測免疫治療效果；檢測家族甲狀腺疾病的發病可能；預測孕婦產后甲狀腺功能障礙的發生。在后期的臨床檢測中會扮演越來越重要的角色。

在抗甲狀腺過氧化物酶抗體的免檢測試劑盒中，酶標板作為免疫檢測試劑盒的關鍵組分之一，不僅要有一定的敏感度和特異性，其重復性和穩定性也是非常重要的，良好的穩定性是其數據可靠性的一個重要標志。但是在目前的檢測試劑盒中，酶標板包被的是TPO抗原，是一種穩定性非常差的蛋白。當TPO抗原包被于酶標板中后，在運輸及長期保存的過程中，抗原的結構有可能發生改變，導致酶標板原有的檢測功能衰退或徹底喪失，從而導致檢測試劑的整體失效。而且，近年來全球極端天氣頻發，這對TPO-Ab試劑盒的出口考驗也越來越嚴格，需要花費大量的成本用于運輸與保存。

發明內容

針對現有技術中的問題，本發明的目的在于提供一種能夠封閉并且保持酶標板穩定性的酶標板用封閉液，達到有效延長TPO-Ab酶聯免疫試劑盒在極端情況下的保質期。

為了實現上述目的，本發明的技術方案具體如下：

本發明提供了一種酶標板用封閉液，其含有金屬有機框架化合物ZIF-70且含量為0.02～0.18g/L。ZIF-70的分子式C₆H₅N₅O₂Zn，分子量為244.5262，選用的配位金屬Zn配體咪唑和2-硝基咪唑進行合成。

更加優選地，其具體合成方法可以為：咪唑、2-甲基咪唑與醋酸鋅按照摩爾比為4:4:1的比例進行混合，混合之后在室溫反應12h形成ZIF-70晶體，離心收集后用去離子水洗滌兩遍，然后真空干燥即可得到。

更加優選地，酶標板用封閉液以磷酸鹽緩沖液為溶劑，并包括以下組分：

所述酶標板用封閉液的pH為5.5～10.0。

更加優選地，所述生物防腐劑為Proclin300。

以其廣譜活性、優越的兼容性和穩定性及其在使用濃度下的低毒性，Proclin300成為用于診斷試劑的理想高效防腐劑。Proclin300防腐劑可在更長的時間內根除細菌、真菌及酵母，從而延長產品的儲存時間。同時其水溶性確保其可輕易溶入所需試劑中，且在推薦使用濃度內無害健康。

更加優選地，酶標板用封閉液以磷酸鹽緩沖液為溶劑，pH為7.4，并包括以下組分：

ZIF-70 0.1g/L，