[發明專利]一株產DHA的裂壺藻GT-D1及其應用、富含DHA油脂及其制備方法

在審

• 申請號: 202210475960.8
• 申請日: 2022-04-29
• 公開（公告）號: CN114940947A
• 公開（公告）日: 2022-08-26
• 發明（設計）人: 楊成飛;韓江;薛勇
• 申請（專利權）人: 深圳古他生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/12
• 分類號: C12N1/12;C12P7/6434;C12P7/6472;C12R1/89
• 代理公司: 廈門加減專利代理事務所(普通合伙) 35234
• 代理人: 盧藝玲

本發明涉及微生物技術領域，特別涉及一株產DHA的裂壺藻GT?D1及其應用、富含DHA油脂及其制備方法，其中，一株產DHA的裂壺藻GT?D1(Schizochytrium limacinum)，保藏編號為CCTCC NO:M20211573，已于2021年12月15日在中國典型培養物保藏中心保藏。該裂壺藻GT?D1在30℃下可以實現DHA的大量產生與富集，提高發酵了溫度，降低了發酵過程的冷卻成本。同時其發酵獲得的油脂中DHA的比例達55％～62％，而油脂中DHA的含量提高意義很大，可以減少提純的成本，具備生產高純度DHA的優勢。

技術領域

本發明涉及微生物技術領域，特別涉及一株產DHA的裂壺藻GT-D1及其 應用、富含DHA油脂及其制備方法。

背景技術

二十二碳六烯酸(22:6n-3,docosahexaenoic acid,DHA)是一種重要的 ω-3系列多不飽和脂肪酸(ω-3polyunsaturated fatty acids)，其既能夠 促進嬰幼兒智力和視力發育，又具有預防老年人心血管疾病、抗癌、抗炎、 增強免疫力等功效。

傳統的提取多不飽和脂肪酸的方法是從深海魚油獲取，但隨著環境污染 以及海洋漁業資源的逐漸匱乏，從深海魚中提取不飽和脂肪酸顯露出存諸多 問題，例如品質不穩定、外源性污染、氣味不良、純化成本高等，魚油中含 有的EPA和膽固醇也使其不適于添加入孕嬰食品中。

裂殖壺菌(Schizochytrium)是目前工業化生產DHA的理想菌種之一，其 屬于破囊壺菌科的一類海洋微藻，通過高密度發酵培養，其體內可積累大量 脂肪，且70％以甘油三酯形式存在，其中DHA可以占到總脂肪酸的45％～ 55％。如公告號為CN105018539B(公告日為2019年2月12日)的專利文 件公開了一種培養裂殖壺菌高產DHA的方法，具體將通過藥瓶培養達到細胞 干重為18～22g/L裂殖壺菌種子液接種到種子罐，培養至轉接水平后，再 接種到發酵罐中，采用前期高溫22～33℃進行高密度培養，后期進行低溫 18～22℃脅迫的方式進行誘導培養110～130小時，期間通過流加葡糖糖溶 液、氮源溶液和堿溶液維持發酵過程中葡萄糖、總氮含量保持一定濃度和pH在5.5～6.5區間。該方法得到的發酵液中細胞干重達到120～150g/L， DHA達到40～50g/L。

又如論文《高產DHA裂壺藻突變株的選育與發酵工藝研究》(發表時間 為2016年5月1日)提到的其裂壺藻ATCC20888的搖瓶產DHA的最佳發酵 條件為選擇接種量為10.5％，溫度為26.5℃，初始pH為6.5，在此培養條 件下，裂壺藻DHA產量平均達6.10g/L。

但上述用于生產DHA的裂壺藻(又稱裂殖壺菌)的發酵工藝中，其發酵 產DHA溫度普遍比較低(一般25℃左右)，這導致在發酵時需要大量的水 來冷卻發酵液，產生較高的冷卻成本，因此，有待進一步改進。

發明內容

為解決上述現有技術中生產DHA的裂壺藻(又稱裂殖壺菌)的發酵工藝 中存在發酵溫度較低的問題，本發明提供一種裂壺藻GT-D1，在30℃下可以 實現DHA的大量產生與富集，提高發酵了溫度，降低了發酵過程的冷卻成本。

本發明提供的裂壺藻GT-D1是從廣東海岸潮間帶積水樣品中的分離篩選 得到的，并證明其在30℃下可以實現DHA的大量產生與富集；該菌株經分類 學研究和分子生物學研究鑒定為裂壺藻(Schizochytrium limacinum)，保藏編 號為：CCTCC NO:M20211573，已于2021年12月08日在中國典型培養物保藏 中心保藏，保藏地址位于中國.武漢.武漢大學。

本發明還提供如上所述的裂壺藻GT-D1在生產DHA中的應用。

本發明還提供一種發酵生產富含DHA油脂的方法，利用如上所述的裂壺 藻GT-D1接種至發酵培養基中，經發酵培養制得富含DHA油脂。