[發明專利]一種豬支原體肺炎滅活疫苗效力評估方法

在審

• 申請號: 202210468801.5
• 申請日: 2022-04-29
• 公開（公告）號: CN114931653A
• 公開（公告）日: 2022-08-23
• 發明（設計）人: 劉漢平;林艷;岳豐雄;陳莉群;夏嘉鑫;鄭勤琴;楊勇;項聰英
• 申請（專利權）人: 成都史紀生物制藥有限公司
• 主分類號: A61K49/00
• 分類號: A61K49/00
• 代理公司: 成都高遠知識產權代理事務所(普通合伙) 51222
• 代理人: 肖柯岑;張娟

本發明提供了一種基于豚鼠DTH的豬支原體肺炎滅活疫苗效力評估方法，包括向豚鼠皮下注射豬支原體肺炎滅活疫苗并加強免疫后，注射豬肺炎支原體抗原誘導DTH反應，根據形成的紅斑大小計算硬結反應直徑，進而評估疫苗效力的步驟。本發明相比于免疫攻毒法、IHA法，成本低廉、操作簡便、能很好的反應疫苗免疫后的細胞免疫應答水平，是一種針對豬支原體肺炎疫苗免疫后效果評估的新方法。

技術領域

本發明涉及疫苗效力評估領域，具體涉及一種豬支原體肺炎滅活疫苗效力評估方法。

背景技術

豬肺炎支原體(Mycoplasma hyopneumoniae，MHP)可引起豬只的支原體肺炎(Mycoplasmal pneu-monia of swine，MPS)，該病的流行與存在長期困擾著世界各地養豬業的健康發展。該病具有發病率高、死亡率低的特點，是一種豬慢性接觸性呼吸道傳染病。疫苗接種是預防和凈化豬支原體肺炎的最有效手段。目前市售疫苗主要有滅活疫苗和活疫苗，其中滅活疫苗以體液免疫為主，活疫苗以細胞免疫為主。

傳統豬支原體肺炎疫苗的效力檢驗方法包括免疫攻毒法、間接血凝試驗(IHA)法。其中免疫攻毒法是通過針對豬只免疫后用強毒攻毒，然后觀察肺臟胰樣肉變的情況來判定疫苗免疫后保護效果，該方法可以直觀有效的判斷出疫苗免疫保護效果，但其成本較高且通過肉眼觀察病變的方式容易受到人為因素干擾。IHA法是通過檢測疫苗免疫大耳白兔后抗體水平的高低從而判定疫苗免疫后保護效果，該方法可以直接反映免疫后血清中抗體水平的高低，但其容易受到試劑盒檢測中試劑的干擾且成本依舊較高。

遲發型超敏反應(DTH)，是由效應性T細胞與相應抗原作用后，引起的以單個核細胞浸潤和組織細胞損傷為主要特征的炎癥反應，豬肺炎支原體(MHP)感染后細胞免疫能力下降，但是通過疫苗免疫后能顯著增加細胞免疫水平，且產生的CD4⁺T細胞多于CD8⁺T細胞，當MHP抗原再次刺激機體后，由CD4⁺T細胞釋放的大量細胞因子可導致明顯的炎性反應，最終導致以單個核細胞浸潤為主的炎癥反應及細胞變性壞死。根據炎性反應強烈程度可以一定程度上反推細胞免疫水平從而評價疫苗免疫效果。

然而，對于炎癥反應強烈程度的判斷目前仍摻雜較多人為主觀因素，尚無系統、標準化的，并且檢測結果準確的檢測方法報道，若能提供基于DTH的檢測方法，將有利于降低成本，為豬支原體肺炎疫苗的效力評估提供新的選擇。

發明內容

本發明的目的在于提供一種基于DTH的豬支原體肺炎滅活疫苗效力評估方法。

本發明提供了一種豬支原體肺炎滅活疫苗效力評估方法，包括如下步驟：

(1)向豚鼠皮下注射豬支原體肺炎滅活疫苗，注射后10～21日以相同劑量第二次注射疫苗加強免疫；

(2)第二次注射疫苗后10～30日，向豚鼠背部不同部位皮內注射等體積的不同檢測試劑，所述檢測試劑包括：植物血球凝集素溶液和豬肺炎支原體抗原溶液；所述肺炎支原體濃度為10^9.0～10^10.0CCU/ml；

(3)注射后24小時，分別測量和計算不同檢測試劑注射部位出現的紅斑大小，計算硬結反應比值；所述硬結反應比值的計算方法為：

r＝d_s/d₀

其中r是硬結反應比值，d_s是注射豬肺炎支原體抗原溶液部位的紅斑大小，d₀是注射植物血球凝集素溶液部位的紅斑大小。

進一步地，上述紅斑大小是指平均紅斑直徑或紅斑面積；

優選地，所述平均紅斑直徑的計算方法為：

d＝(d₁+d₂)/2，