[發明專利]一種脫細胞瘢痕皮膚支架材料及其制備方法與應用

在審

• 申請號: 202210438195.2
• 申請日: 2022-04-20
• 公開（公告）號: CN114732959A
• 公開（公告）日: 2022-07-12
• 發明（設計）人: 賴晨智;宗憲磊;靳小雷;宋國棟
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院整形外科醫院
• 主分類號: A61L27/60
• 分類號: A61L27/60;A61L27/36
• 代理公司: 北京輕創知識產權代理有限公司 11212
• 代理人: 姜展志

本發明屬于醫學領域，公開了一種脫細胞瘢痕皮膚支架材料及其制備方法與應用，所述脫細胞瘢痕皮膚支架材料的制備方法，包括如下步驟：步驟1：切除瘢痕標本中表皮及皮下組織，將獲得的組織切成的薄片，再將薄片中的病毒進行滅活；步驟2:將步驟1處理后的薄片中細胞進行溶解；步驟3：將步驟2處理后的薄片儲存于抗生素溶液中，并置于低溫條件下備用，即完成脫細胞瘢痕皮膚支架材料的制備。其制備成本低，且可以實現離體瘢痕皮膚資源的合理利用，抗原性弱，且降解速度慢，使用壽命長，營養滲透性好、血管化速度快且血管化程度高，皮片成活率高。

技術領域

本發明屬于醫學領域，尤其涉及一種脫細胞瘢痕皮膚支架材料及其制備方法與應用。

背景技術

真皮支架材料(ADM)為宿主細胞提供了三維的生長附著環境，是組織進行修復重建的關鍵因素。自ADM作為真皮支架材料被報道于應用于創面修復以來，ADM是皮膚重建中理想的支架材料。ADM可以作為體外支持系統調節成纖維細胞的增殖分化，同時下調其細胞外基質成分的分泌，包括膠原蛋白的過度表達，減輕創面瘢痕的產生。然而，當前市面上使用的真皮支架材料的缺點包括費用昂貴，血管化程度有限，抗原性強，來源有限及材料降解過快，營養滲透性差、血管化速度慢、皮片成活率低等，限制了臨床廣泛應用。我們發現，具有大面積瘢痕的患者通常會經歷幾次瘢痕切除術，因此能否使用上一次瘢痕切除后制備的皮膚材料來進行下一次瘢痕切除后的創面修復，從而克服當前市面上皮膚支架材料的缺點，是我們進行本專利申請的立足點。

發明內容

為了解決上述技術問題，本發明的目的之一在于提供一種成本低，且抗原性弱，且實現資源合理利用的脫細胞瘢痕皮膚支架材料的制備方法。

為了實現上述目的，本發明的技術方案如下：一種脫細胞瘢痕皮膚支架材料的制備方法，包括如下步驟：

步驟1：切除瘢痕標本中表皮及皮下組織，將獲得的組織切成的薄片，再將薄片中的病毒進行滅活；

步驟2:將步驟1處理后的薄片中細胞進行溶解；

步驟3：將步驟2處理后的薄片儲存于抗生素溶液中，并置于低溫條件下備用，即完成脫細胞瘢痕皮膚支架材料的制備。

上述技術方案中所述步驟1中薄片病毒滅活方式是：將薄片置于消毒液中浸泡1.5-2.5h，然后將薄片取出后洗除殘留的消毒液即可。

上述技術方案中所述消毒液為過氧乙酸和乙醇混合的水溶液，其中，所述消毒液中過氧乙酸的濃度為1vol％，所述消毒液中乙醇的濃度為24vol％。

上述技術方案中所述薄片洗除殘留消毒液的方式是：先將薄片置于無菌的PBS緩沖液或無菌的生理鹽水中浸泡20-40min,中途更換1-3次浸泡液，然后再將薄片置于純水中清洗1-3次，每次清洗時長為5-15min。

上述技術方案中所述步驟2中薄片中細胞溶解的方式是：將薄片先置于細胞膜消解液中浸泡2h并持續振蕩，再將薄片取出再置于細胞核消解液中，并在37℃下持續振蕩72小時，期間每間隔24小時更換一次細胞核消解液，最后將薄片取出后洗除殘留的細胞核消解液即可。

上述技術方案中所述細胞膜消解液為胰蛋白酶和EDTA-Na₂混合的水溶液，所述細胞膜消解液中的胰蛋白酶濃度為2.5g/L，所述細胞膜消解液中的EDTA-Na₂的濃度為0.5mmol/L。

上述技術方案中所述細胞核消解液為濃度為1vol％的Triton X-100溶液。

上述技術方案中所述薄片洗除殘留細胞核消解液的方式是：先將薄片置于無菌的PBS緩沖液或無菌的生理鹽水中浸泡20-40min,中途更換1-3次浸泡液，然后再將薄片置于純水中清洗1-3次，每次清洗時長為5-15min。

本發明的目的之二在于提供一種采用如上所述制備方法所制得的脫細胞瘢痕皮膚支架材料。