[發明專利]一種可以分泌纖維膨脹蛋白的工程菌株、構建方法及應用

在審

• 申請號: 202210433263.6
• 申請日: 2022-04-24
• 公開（公告）號: CN114806900A
• 公開（公告）日: 2022-07-29
• 發明（設計）人: 張天元;邵雄俊;薛怡蕓
• 申請（專利權）人: 蘇州聚維元創生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/15
• 分類號: C12N1/15;C12N15/31;C12N15/74;C12P19/14;C12P19/02;C12R1/145
• 代理公司: 天津市君硯知識產權代理有限公司 12239
• 代理人: 高文迪

1.一種可以分泌纖維膨脹蛋白的工程菌株，其特征在于：所述菌株為帶有用于重組表達纖維膨脹蛋白基因Clocl-1298的熱纖梭菌工程菌。

2.根據權利要求1所述的工程菌株，其特征在于：所述菌株為將熱纖梭菌cel9K中SEQID No:1的核苷酸序列替換為纖維膨脹蛋白基因Clocl-1298重組得到的工程菌。

3.根據權利要求1或2所述的工程菌株，其特征在于：所述纖維膨脹蛋白基因Clocl-1298來源于克萊弗雷梭菌（Clostridium clarifavum）DSM19732。

4.權利要求1所述的可以分泌纖維膨脹蛋白的工程菌株的構建方法，其特征在于：將纖維膨脹蛋白基因Clocl_1298重組表達到熱纖梭菌基因組上，得到可以分泌纖維膨脹蛋白的工程菌株。

5.根據權利要求4所述的構建方法，其特征在于：將熱纖梭菌基因組上cel9K基因中如SEQ ID No:1所示的核苷酸序列替換為纖維膨脹蛋白基因Clocl-1298的基因序列，得到重組熱纖梭菌工程菌。

6.根據權利要求4所述的構建方法，其特征在于：所述纖維膨脹蛋白基因Clocl-1298的核苷酸序列如SEQ ID No:2所示。

7.根據權利要求4所述的構建方法，其特征在于：所述熱纖梭菌為熱纖梭菌（Clostridium thermocellum）PN2102，保藏日期為 2021年07月09日，保藏單位為中國普通微生物菌種保藏管理中心，保藏編號分別為CGMCC No.22869。

8.根據權利要求4所述的構建方法，其特征在于包括步驟：（1）設計及構建纖維膨脹蛋白基因插入的重組質粒PUC-Clocl-1298；（2）將重組質粒PUC-Clocl-1298轉入熱纖梭菌；（3）挑選及PCR驗證陽性單克隆，得到重組熱纖梭菌工程菌株。

9.權利要求1所述的可以分泌纖維膨脹蛋白的工程菌株在木質纖維素水解中的應用。

10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于：將熱纖梭菌工程菌的厭氧發酵發酵液復配纖維素酶對秸稈纖維進行水解。