[發(fā)明專利]肌肉干細(xì)胞分離提取及新型水解物培養(yǎng)體系及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210425661.3
• 申請(qǐng)日: 2022-04-21
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN114703126A
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-07-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王飛;黃彬璐;陳佳沁
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海食未生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/074
• 分類號(hào): C12N5/074;C12N5/077;A23L13/00
• 代理公司: 上海光華專利事務(wù)所(普通合伙) 31219
• 代理人: 陳艷娟;許亦琳

1.非動(dòng)物源水解物作為血清替代物在培養(yǎng)肌肉干細(xì)胞中的用途。

2.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述非動(dòng)物源水解物為酵母水解物。

3.如權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于，所述酵母水解物為面包酵母水解物。

4.如權(quán)利要求2或3所述的用途，其特征在于，所述酵母水解物中氨基氮與總氮的質(zhì)量比為25-50；和/或，分子量位于大于2KDa、1-2kDa、400Da-1kDa、180-400Da、小于180Da范圍的多肽在總多肽中的質(zhì)量百分比分別為0.5～0.8％、0.8～15％、15～38％、40～60％、10～15％。

5.一種肌肉干細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于，所述肌肉干細(xì)胞培養(yǎng)基包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基、如權(quán)利要求1～4任一項(xiàng)所述的用途中所述的非動(dòng)物源水解物和FGF2。

6.如權(quán)利要求5所述的肌肉干細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于，包括以下至少任一項(xiàng)：

1)以非動(dòng)物源水解物干重計(jì)，所述非動(dòng)物源水解物在肌肉干細(xì)胞培養(yǎng)基中的濃度為0.1-20mg/ml；

2)所述FGF2在肌肉干細(xì)胞培養(yǎng)基中的濃度為1-50ng/ml；

3)所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基選自DMEM、RPMI 1640、MEM、DMEM/F12、F10、CD293、medium 231、medium 106以及以此為基礎(chǔ)改良的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的至少一種；優(yōu)選地，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基為DMEM。

7.如權(quán)利要求5所述的肌肉干細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于，所述肌肉干細(xì)胞培養(yǎng)基還包括血清；優(yōu)選地，所述血清在肌肉干細(xì)胞培養(yǎng)基中的體積百分比為0.5-2％。

8.如權(quán)利要求5～7任一項(xiàng)所述的肌肉干細(xì)胞培養(yǎng)基在肌肉干細(xì)胞體外培養(yǎng)中的用途。

9.如權(quán)利要求8所述的用途，其特征在于，所述非動(dòng)物源水解物用于促進(jìn)肌肉干細(xì)胞在體外的增殖，且使肌肉干細(xì)胞保持干性。

10.一種肌肉干細(xì)胞體外培養(yǎng)方法，其特征在于，采用如權(quán)利要求5～7任一項(xiàng)所述的肌肉干細(xì)胞培養(yǎng)基在體外培養(yǎng)肌肉干細(xì)胞。

11.一種肌肉干細(xì)胞體外培養(yǎng)方法，其特征在于，所述方法還包括肌肉干細(xì)胞的分離步驟；優(yōu)選地，所述培養(yǎng)方法包括：

(1)組織收集

收集肌肉組織，進(jìn)行除菌處理；

(2)組織破碎及消化

將肌肉組織破碎，然后加入蛋白酶進(jìn)行消化，獲得消化液；

(3)組織過(guò)濾

對(duì)所述消化液進(jìn)行過(guò)濾，離心，獲得細(xì)胞沉淀；

(4)細(xì)胞接種、培養(yǎng)

采用如權(quán)利要求5～7任一項(xiàng)所述的肌肉干細(xì)胞培養(yǎng)基重懸將所述細(xì)胞沉淀，并接種至培養(yǎng)皿中進(jìn)行培養(yǎng)。

12.一種肌肉干細(xì)胞，其特征在于，由如權(quán)利要求10或11所述的體外培養(yǎng)方法培養(yǎng)獲得。

13.一種細(xì)胞培養(yǎng)肉，其特征在于，包括下列步驟：

1)按照權(quán)利要求10或11所述的體外培養(yǎng)方法培養(yǎng)獲得肌肉干細(xì)胞；

2)收獲所述肌肉干細(xì)胞，在合適形成肌肉纖維和紋理的條件下，培養(yǎng)獲得所述細(xì)胞培養(yǎng)肉。

14.如權(quán)利要求1～4任一項(xiàng)所述的用途或如權(quán)利要求5～7任一項(xiàng)所述的肌肉干細(xì)胞培養(yǎng)基或如權(quán)利要求8或9所述的用途或如權(quán)利要求10或11所述的培養(yǎng)方法或如權(quán)利要求12所述的肌肉干細(xì)胞或如權(quán)利要求14所述的細(xì)胞培養(yǎng)肉，其特征在于，所述肌肉干細(xì)胞為牛肌肉干細(xì)胞，豬肌肉干細(xì)胞，兔肌肉干細(xì)胞至少任一；優(yōu)選地，所述肌肉干細(xì)胞為牛肌肉干細(xì)胞。