[發明專利]一種腸炎沙門氏菌膠體金免疫層析試紙條制備方法

在審

• 申請號: 202210425121.5
• 申請日: 2022-04-22
• 公開（公告）號: CN114720690A
• 公開（公告）日: 2022-07-08
• 發明（設計）人: 陳海蘭;楊松鑫;郭隆華;王悅靚;胡庭俊;韋英明;于美玲;江明生;司紅彬
• 申請（專利權）人: 廣西大學
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/58;G01N33/569;G01N33/558;G01N33/543;G01N33/52
• 代理公司: 重慶信必達知識產權代理有限公司 50286
• 代理人: 李小偉

本發明屬于免疫檢測技術領域，公開了一種腸炎沙門氏菌膠體金免疫層析試紙條制備方法，包括：利用優化的Tris?base輔助法制備膠體金，并與腸炎沙門氏菌單克隆抗體偶聯，得到免疫標簽；將經過篩選的樣品墊、固定有免疫標簽的結合墊、固定有T/C線抗體的NC膜、吸水紙與PVC組裝得到腸炎沙門氏菌膠體金免疫層析試紙條。本發明基于Tris輔助法制備均勻度和穩定性更好的膠體金，以此為標記物建立的腸炎沙門氏菌膠體金免疫層析試紙條，敏感性高，特異性好，重復性好，各方面性能均達到臨床快速檢測的要求，證明基于Tris輔助法制備的腸炎沙門氏菌膠體金免疫層析試紙條，可用于臨床現場檢測。

技術領域

本發明屬于免疫檢測技術領域，尤其涉及一種腸炎沙門氏菌膠體金免疫層析試紙條制備方法。

背景技術

目前，腸炎沙門氏菌是一種常見的人畜共患腸道病原菌，是引起急性胃腸炎的主要病原菌，可引起畜禽和人類腹瀉、嘔吐、發熱等臨床癥狀，嚴重可造成敗血癥、脫水、死亡。腸炎沙門氏菌也是近年來引起細菌性食物中毒等的主要原因，威脅人類健康，對國家造成了很大的經濟損失，因此建立一種能夠快速檢測腸炎沙門氏菌的方法顯得十分重要。

沙門氏菌(Salmonella)屬于腸桿菌科，革蘭氏陰性腸道桿菌，菌體呈橢圓形，大小為(0.6～0.9)×(1～3)微米，通常無莢膜，除個別屬外都有周身鞭毛。具有菌體(O)抗原、鞭毛(H)抗原和表面(Vi)抗原3種復雜的抗原結構，有2600多種血清型。國際獸疫局將其定為B類傳染病。沙門氏菌廣泛存在于禽畜、雞蛋、牛奶、牛肉和飼料中，在家禽和家禽產品中尤其常見，還能夠通過食源性途徑傳染給人類，引起一系列胃腸道疾病，在美國，每年就有超過1500萬人感染沙門氏菌。據我國2015年食源性監測報告顯示，沙門氏菌是微生物性食源性疾病暴發的主要致病因子之一，因此比其他病原體對人類健康和安全的影響更大。據2018年6-10月河北省市售豬肉餡及冷鮮雞中腸炎沙門氏菌污染情況調查與分析結果顯示，沙門氏菌陽性檢出率為63％，檢出率較高，有較大的食品安全隱患。現有技術1從48份飼料及飼料添加劑中分理出5株沙門氏菌，檢出率較高，是飼料中常見的致病菌，嚴重影響養殖場的健康管理。其中，腸炎沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌和傷寒沙門氏菌是最為常見的沙門氏菌類型。據報道，腸炎沙門氏菌是造成畜禽發病死亡的重要因素，也是食物中毒事件的主要病原，但由于腸炎沙門氏菌血清型多樣性以及與其他引起腹瀉癥狀的病原發病癥狀相似，在臨床癥狀上比較難分辨，因此對本細菌建立快速準確的檢測方法就顯得比較重要。

目前，腸炎沙門氏菌病原體的臨床檢測，大多是借助實驗室診斷進行分析檢測，包括腸炎沙門氏菌分離與鑒定、酶聯免疫吸附試驗(ELISA)、聚合酶鏈反應(PCR)、實時熒光定量RT-PCR和環介導等溫核酸擴增技術(LAMP)等。其中腸炎沙門氏菌分離與鑒定技術僅可檢測出活菌，但診斷時間較長，操作復雜，ELISA技術雖然靈敏準確，但也同樣有診斷時間較長操作繁雜其需要精密儀器設備的缺點。后者幾種檢測方法雖然靈敏度高，特異性強，但技術門檻較高，需要專業的操作人員和設備，只適用于實驗室準確檢測，限制了現場和臨床診斷。免疫層析檢測技術(immunochromatographyassay,ICA)是1990年代興起的快速診斷技術，是一種將色譜法和免疫學反應相結合的快速檢測技術。根據信號標記物的不同，目前免疫層析技術主要包含膠體金免疫層析技術、量子點免疫層析技術、磁球免疫層析技術、熒光微球免疫層析技術、時間分辨熒光免疫層析技術等。其中膠體金免疫層析技術是比較常用的免疫層析技術，可由未經任何培訓人員在現場不借助任何儀器設備完成目標成分的快速檢測。傳統膠體金免疫層析技術常用的金顆粒都是采用Frens法制備的，但這種方法制備的膠體金穩定性差，制備的試紙條靈敏度低，

通過上述分析，現有技術存在的問題及缺陷為：現有技術制備的膠體金免疫層析試紙條穩定性差，且靈敏度低；現有技術制備的膠體金顆粒不夠均一、形狀不夠均勻、穩定性較低。

發明內容

針對現有技術存在的問題，本發明提供了一種腸炎沙門氏菌膠體金免疫層析試紙條制備方法。