[發(fā)明專利]一種中國對蝦核心育種群WSSV的凈化方法

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• 申請日: 2022-04-21
• 公開（公告）號: CN114600811A
• 公開（公告）日: 2022-06-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 何玉英;王瓊;常志強(qiáng);王佳佳;李健
• 申請（專利權(quán)）人: 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所
• 主分類號: A01K61/59
• 分類號: A01K61/59;C12Q1/70;C12Q1/686;C12R1/93
• 代理公司: 北京科家知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11427
• 代理人: 沈小明

本發(fā)明公開了一種中國對蝦核心育種群WSSV的凈化方法，包括以下步驟：收集越冬池中中國對蝦親蝦糞便進(jìn)行WSSV檢測，淘汰檢測結(jié)果為陽性的越冬池中的親蝦；對選留的親蝦進(jìn)行單個檢測，淘汰檢測結(jié)果為陽性的個體；選留親蝦產(chǎn)卵孵化后對育苗池的仔蝦進(jìn)行抽樣混合檢測，淘汰陽性仔蝦；將檢測結(jié)果為陰性的仔蝦個體放于室外養(yǎng)殖池的圍格中進(jìn)行養(yǎng)殖；收獲時對每個圍格養(yǎng)殖個體進(jìn)行抽樣混合檢測，選留檢測結(jié)果為陰性的圍格內(nèi)交尾雌蝦進(jìn)行越冬，作為第二年苗種繁育的親蝦。采用上述凈化方案對中國對蝦核心育種群進(jìn)行連續(xù)多代的凈化，可顯著降低WSSV傳播的風(fēng)險(xiǎn)，提高中國對蝦的養(yǎng)殖成功率和產(chǎn)品質(zhì)量安全。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于中國對蝦育種技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種中國對蝦核心育種群 WSSV的凈化方法。

背景技術(shù)

中國對蝦(Fenneropenaeus chinensis)又稱東方對蝦、中國明對蝦，是我國近海地方性特有種。中國對蝦肉質(zhì)鮮嫩味美，營養(yǎng)價值高，一直是我國江蘇、山東、河北和遼寧等沿海地區(qū)的重要養(yǎng)殖物種，在養(yǎng)殖發(fā)展盛期(1990年前后)養(yǎng)殖產(chǎn)量達(dá)20萬噸左右，占我國對蝦養(yǎng)殖產(chǎn)量的70％。1993年由于大規(guī)模白斑綜合征病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)的爆發(fā)，中國對蝦的養(yǎng)殖產(chǎn)量急劇下降，年產(chǎn)量長期徘徊在5萬噸左右，經(jīng)濟(jì)損失慘重。

WSSV具有宿主范圍廣泛、感染能力強(qiáng)和致死率高等特點(diǎn)，中國對蝦感染 WSSV后，3-10天死亡率可達(dá)100％，其傳播方式既可以在養(yǎng)殖水體中進(jìn)行水平傳播也可以有親代向子代垂直傳播。為了降低WSSV對水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成的損失，科研工作者對WSSV的基因組、與宿主互作的機(jī)制、檢測方法的改進(jìn)及防治等方面開展了大量的研究，但目前還沒有有效預(yù)防疫苗和治療藥物。因此，對中國對蝦核心育種群采取凈化措施，加強(qiáng)親蝦和苗種的檢測，從源頭上減少蝦苗帶毒的概率，對于保障我國中國對蝦種質(zhì)資源質(zhì)量，防止WSSV傳播和流行具有重要意義。

水產(chǎn)種業(yè)是水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的基礎(chǔ)和源頭，如果對核心育種群的種苗攜帶病原勢必會使整個養(yǎng)殖業(yè)面臨嚴(yán)重的疫病風(fēng)險(xiǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種中國對蝦核心育種群WSSV的凈化方法，該方法在中國對蝦良種選育的基礎(chǔ)上，重點(diǎn)針對對中國對蝦養(yǎng)殖業(yè)危害最嚴(yán)重的白斑綜合征病毒(WSSV)，通過對親蝦、苗種以及養(yǎng)殖過程中WSSV的全面監(jiān)測和持續(xù)凈化，綜合降低中國對蝦核心育種群中WSSV傳播的風(fēng)險(xiǎn)，推動中國對蝦疾病防控從有效控制到逐步凈化消滅的轉(zhuǎn)變，提高中國對蝦的養(yǎng)殖成功率和產(chǎn)品質(zhì)量安全。

本發(fā)明提供了一種中國對蝦核心育種群WSSV的凈化方法，包括以下操作步驟：

(1)收集越冬池中國對蝦已交尾雌蝦(親蝦)糞便，套式PCR檢測法對親蝦糞便進(jìn)行WSSV檢測，淘汰檢測結(jié)果為陽性的越冬池中的親蝦；每個越冬池的親蝦數(shù)量控制在200尾左右，分別在早、中、晚三個時間點(diǎn)收集親蝦糞便3 份分別放入滅菌的1.5mL的離心管中，連續(xù)收集3天。每尾親蝦的價格很高，每個越冬池控制數(shù)量在200尾，如果檢測糞便為陽性，則將該越冬池的親蝦淘汰，不至于造成太大的經(jīng)濟(jì)損失；另外通過連續(xù)3天采集糞便進(jìn)行取樣，幾乎能保證大部分親蝦都能取樣到，而且不會造成檢測負(fù)擔(dān)。

(2)對選留的親蝦進(jìn)行單個檢測，淘汰檢測結(jié)果為陽性的個體；這一步驟保證了每一尾選留的親蝦都不攜帶WSSV，同時由于核心育種群數(shù)量控制在 1000尾左右，因此即使每尾親蝦都檢測也不會有太大的工作量；如果沒有步驟 (1)的篩選，此步驟的檢測工作量會很大，在實(shí)際生產(chǎn)中，越冬親蝦的陽性率高達(dá)50％以上，因此如果想要篩選出1000尾不攜帶WSSV的親本，則至少檢測2000尾以上的親蝦。

(3)選留的親蝦進(jìn)行產(chǎn)卵和孵化，待幼體發(fā)育至放苗規(guī)格時(體長約1.0cm) 對每個育苗池的仔蝦進(jìn)行抽樣混合檢測，淘汰陽性仔蝦；