[發明專利]RARG-HNRNPM融合基因檢測及臨床應用試劑盒

在審

• 申請號: 202210417036.4
• 申請日: 2022-04-20
• 公開（公告）號: CN115058515A
• 公開（公告）日: 2022-09-16
• 發明（設計）人: 秘營昌;侯降雪;宋洋;劉凱奇;王建祥
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院血液病醫院（中國醫學科學院血液學研究所）
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/11;C12Q1/6851
• 代理公司: 天津英揚昊睿專利代理事務所(普通合伙) 12227
• 代理人: 吳揚

本發明為一種RARG?HNRNPM融合基因檢測及臨床應用試劑盒，其特征在于其包含基于Taqman探針的變異型急性早幼粒細胞白血病診斷和/或檢測試劑盒檢測RARG?HNRNPM融合基因絕對定量的試劑，利用本發明對變異型急性早幼粒細胞白血進行檢測，首次發現并驗證了變異型APL中特殊融合基因RARG?HNRNPM，可用于檢測患者標本中該融合基因表達水平，可用于疾病確診和MRD進行監測。

技術領域

本發明涉及分子生物學技術領域，尤其涉及一種RARG-HNRNPM融合基因檢 測及臨床應用試劑盒。

背景技術

急性早幼粒細胞白血病(APL)是一種特殊類型的急性髓系白血病，典型特 征為t(15；17)(q22；q21)染色體易位及形成的PML-RARA融合基因。其臨床特征 包括嚴重的凝血障礙和出血傾向，以及對亞砷酸(ATO)、全反式維甲酸(ATRA) 和蒽環類藥物治療敏感；被認為是“可治愈類型白血病”。而變異型APL是指 臨床表現、形態學以及免疫表型特征與APL相同，但缺乏PML-RARA融合基因， 且通常對ATO和/或ATRA不敏感的罕見病例。目前報道的變異型APL融合基因 包括RARA、RARB以及RARG相關融合基因，這些患者都表現出與APL相似的臨 床、形態和免疫表型特征。文獻檢索到的RARG重排病例12例，主要涉及 CPSF6-RARG、NUP98-RARG、NPM1-RARG-NPM1、PML-RARG和HNRNPC-RARG。根據 上述報道，RARG重排患者對ATRA耐藥，但對以蒽環類藥物為基礎的化療部分敏 感，治療方案有別于典型APL，預后有待進一步觀察。

為評估經典型APL的療效及預測復發風險，目前臨床采用的監測方法包括 流式微小殘留病(MRD)、PML-RARA融合基因定量等，其中融合基因PML-RARA 定量監測對于疾病狀態預測更為敏感。然而對于RARG-HNRNPM陽性的變異型APL， 目前缺乏能夠較為準確評估疾病狀態的分子學指標。

發明內容

根據以上技術問題，本發明提供一種基于Taqman探針的變異型急性早幼粒 細胞白血病診斷和/或檢測試劑盒檢測RARG-HNRNPM融合基因絕對定量的試劑。

所述試劑盒包括上游引物、下游引物、Taqman探針、內參、PCR反應混合 液、DEPC-H₂O。

RARG-HNRNPM上游引物:ATGAAAATCACCGACCTCCG

RARG-HNRNPM下游引物：CCTTGACTTTCCTTCAGCGT

RARG-HNRNPM探針:AGCACTAAGGTTGGTGAGGTAAC

內參GAPDH：Hs02786624_g1 inventoried(Applied Biosystems)

PCR反應緩沖液:Taqman^TM Gene Expression Master Mix 4369016(AppliedBiosystems)，包括反應所需的dNTP,Ca²⁺,Mg²⁺等。

陽性對照：包含帶有RARG-HNRNPM融合基因的目的質粒標準品

陰性對照：APL細胞系NB4的cDNA

RARG-HNRNPM融合基因Taqman探針的5’端標記有FAM基團，3’端標記 有TAM基團；內參基因GAPDH的Taqman探針5’端標記有FAM基團，3’端標記 有NFQ基團。FAM為熒光報告基團，NFQ為淬滅基團。當待測樣品中存在目標DNA 分子時，探針與目標DNA分子結合，探針降解釋放熒光報告基團發出熒光。待 測樣品中不存在目標DNA分子，熒光報告基團淬滅，不發出熒光。

試劑盒具體操作步驟：

一、標本采集、分離單個核細胞，提取單個核細胞mRNA