[發明專利]一種PSGL-1人源化非人類動物模型的構建方法及應用

有效

• 申請號: 202210409835.7
• 申請日: 2022-04-19
• 公開（公告）號: CN114747541B
• 公開（公告）日: 2022-12-13
• 發明（設計）人: 楊志偉;吳獻賢;劉星;王智慧
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院醫學實驗動物研究所
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;A01K67/027;C12N15/113;C12N15/85;C12N15/89;A61K49/00
• 代理公司: 北京預立生科知識產權代理有限公司 11736
• 代理人: 高倩倩

1.一種基于CRISPR/Cas9技術構建的非人類動物模型，其特征在于，該模型為人源PSGL-1敲入非人類動物模型；

所述非人類動物模型敲入位點為Rosa26位點；

PSGL-1的序列如SEQ ID NO.1所示；

所述動物是嚙齒動物；

所述嚙齒動物是小鼠；

所述小鼠是C57BL/6J小鼠。

2.一種用于編輯PSGL-1的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA的序列如SEQ ID NO.3-13所示。

3.根據權利要求2所述的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA序列如SEQ ID NO.3-4，SEQ IDNO.10-13所示。

4.根據權利要求3所述的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA序列如SEQ ID NO.3，SEQ IDNO.10所示。

5.一種表達人源PSGL-1基因的打靶載體，其特征在于，所述打靶載體包括5’同源臂、人源PSGL-1基因、終止密碼子、WPRE元件、Poly A和3’同源臂；

所述PSGL-1的序列如SEQ ID NO.1所示。

6.一種用于在Rosa26位點定點敲入人源PSGL-1基因的CRISPR/Cas9系統，其特征在于，所述CRISPR/Cas9系統包含權利要求5所述的打靶載體。

7.構建人源PSGL-1非人類動物模型的方法，其特征在于，所述方法通過將PSGL-1引入非人類動物的單細胞胚胎或胚胎干細胞的基因組來修飾非人類動物的基因組；

所述方法包括以下步驟：

（1）構建打靶載體；

（2）制備sgRNA和Cas9 mRNA；

（3）將所述打靶載體、Cas9 mRNA和sgRNA混合，注射入受精卵細胞，并移植到假孕動物的輸卵管中，獲得敲入人源PSGL-1的F0代陽性動物；

（4）將F0代陽性動物與野生型動物雜交，獲得F1代陽性雜合動物；

（5）將F1代陽性雜合動物自交獲得穩定遺傳的人源PSGL-1非人類動物模型；

敲入位點為Rosa26位點；

Rosa26 loci的基因組序列如SEQ ID NO.2所示；

步驟（1）所述的打靶載體包括5’同源臂、人源PSGL-1基因、終止密碼子、WPRE元件、PolyA和3’同源臂；

所述PSGL-1的序列如SEQ ID NO.1所示；

步驟（2）所述的sgRNA序列如SEQ ID NO.3-13所示。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述sgRNA序列如SEQ ID NO.3-4，SEQ IDNO.10-13所示。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述sgRNA序列如SEQ ID NO.3，SEQ IDNO.10所示。

10.根據權利要求7-9任一項所述的方法，其特征在于，鑒定敲入人源PSGL-1的方法為PCR鑒定；

PCR鑒定F0代陽性動物所用引物的序列如SEQ ID NO.14-19所示；

PCR鑒定F1代陽性動物所用引物的序列如SEQ ID NO.16-19所示；

PCR鑒定穩定遺傳的人源PSGL-1非人類動物模型所用引物的序列如SEQ ID NO.20-23所示。

11.一種獲得敲入人源PSGL-1的非人類動物的方法，其特征在于，飼養權利要求7-10任一項所述的方法構建的人源PSGL-1敲入的模型動物。

12.根據權利要求7-11任一項所述的方法，其特征在于，所述動物是嚙齒動物；

所述嚙齒動物是小鼠；

所述小鼠是C57BL/6J小鼠。

13.權利要求7-12任一項所述的方法獲得的模型動物在篩選預防或治療炎癥相關疾病藥物中的應用；

所述炎癥相關疾病包括結腸炎、胰腺炎、腹主動脈瘤、動脈粥硬化。