[發明專利]一種草本纖維提取用微生物菌劑及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202210402900.3
• 申請日: 2022-04-15
• 公開（公告）號: CN114657104B
• 公開（公告）日: 2022-11-18
• 發明（設計）人: 成莉鳳;段盛文;馮湘沅;楊琦;鄭科;彭正紅
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院麻類研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/04;C12N1/36;D21C5/00
• 代理公司: 長沙智路知識產權代理事務所(普通合伙) 43244
• 代理人: 陳建國

1.一種草本纖維提取用微生物菌劑的制備方法，其特征在于，

包括：

將活化后的DCE-01菌種接種至改良發酵培養液中擴培發酵，隨后將獲得的成熟發酵液濃縮，最后添加保護劑，混勻后將得到的菌懸液干燥即可；

所述改良發酵培養液為含有甘露糖0.08-0.25wt％、海藻糖0.075-0.24wt％和葡萄糖0.2-0.55wt％的發酵培養液。

2.根據權利要求1所述的草本纖維提取用微生物菌劑的制備方法，其特征在于，

所述保護劑為包含糖類、蛋白質和淀粉的復合保護劑；

優選地，所述保護劑為由玉米淀粉、脫脂奶粉、海藻糖、乳糖、糊精、甘露醇、谷氨酸鈉和甘油組成的復合保護劑。

3.根據權利要求2所述的草本纖維提取用微生物菌劑的制備方法，其特征在于，

在所述復合保護劑中，

所述糊精、海藻糖、乳糖的質量比為10∶3-5∶2-1；

和/或，所述玉米淀粉和脫脂奶粉的質量比為1∶3-5。

4.根據權利要求2所述的草本纖維提取用微生物菌劑的制備方法，其特征在于，

所述保護劑的加入質量為濃縮后的成熟發酵液的質量的0.4-0.5倍。

5.根據權利要求1-4任一項所述的草本纖維提取用微生物菌劑的制備方法，其特征在于，

所述改良發酵培養液的配方為：

甘露糖0.1-0.2wt％+海藻糖0.1-0.2wt％+葡萄糖0.3-0.5wt％+牛肉膏0.5wt％+蛋白胨0.5wt％+NaCl 0.5wt％，余量為水；

優選地，所述草本纖維提取用微生物菌劑的制備方法還包括，在將活化后的DCE-01菌種接種至改良發酵培養液中擴培發酵之前，通過加入NH₃·H₂O將所述改良發酵培養液的pH調節為7.0-7.5，隨后在115℃下滅菌18-25min。

6.根據權利要求1-5任一項所述的草本纖維提取用微生物菌劑的制備方法，其特征在于，

所述擴培發酵具體包括：

將活化后的DCE-01菌種的種子液與改良發酵培養液按體積比為1∶30-50的比例置于密封的發酵罐中，并控制發酵罐的灌裝量為其容積的0.5-0.6倍，同時通過添加NH₃·H₂O控制pH值為6.7-7.0，在32-35℃、180-200rpm和對應于每升種子液的通氣量為0.5-0.7m³/h的條件下，發酵培養8-10h直至其pH值恒定或上升；

優選地，擴培發酵所獲得的成熟發酵液中，所述DCE-01菌的濃度大于2×10⁸cfu/mL；和/或，所述濃縮為采用孔徑為0.2μm的超濾膜包對所獲得的成熟發酵液濃縮7.5-15倍。

7.根據權利要求1-6任一項所述的草本纖維提取用微生物菌劑的制備方法，其特征在于，

所述活化具體為：

將混有DCE-01菌苔的營養肉湯培養液接種至30-50倍體積的營養肉湯培養液中并混勻，在33-35℃和150-180rpm條件下培養5-6h得一級種子液，隨后再將一級種子液與200-350倍體積的營養肉湯培養液混勻，在33-35℃和150-180rpm條件下培養5-6h得二級種子液；

優選地，所述營養肉湯培養液的配方為：

葡萄糖1wt％+牛肉膏0.5wt％+蛋白胨0.5wt％+NaCl 0.5wt％，并用NaOH調pH值為7.0-7.5；

進一步優選地，所述DCE-01菌苔的制備方法為：

將冷馴化的DCE-01菌種接種至營養肉湯培養液中并混勻，在33-35℃下培養5-6h，稀釋后涂布于YQ營養瓊脂平板中，在33-35℃下培養18-20h后分離單菌落，挑選典型菌落劃線于新鮮斜面上，在33-35℃下培養18-20h后真空包裝，常溫保存，半年內有效。

8.根據權利要求1-7任一項所述的草本纖維提取用微生物菌劑的制備方法，其特征在于，

所述菌懸液的干燥具體采用冷凍噴霧干燥法。