[發明專利]一種人源抗體表達質粒及其構建方法

有效

• 申請號: 202210346411.0
• 申請日: 2022-04-02
• 公開（公告）號: CN114480501B
• 公開（公告）日: 2023-01-24
• 發明（設計）人: 陳薇;李建民;郝勐;于長明;徐俊杰;侯利華;遲象陽;卞婷;陳旖;付玲;董韻竹;房婷;劉樹玲
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/66;C12N15/65;C12N15/13
• 代理公司: 北京市眾天律師事務所 11478
• 代理人: 李新軍

本發明公開了一種人源抗體表達質粒系統，所述人源抗體表達質粒系統包括人源抗體重鏈表達質粒和人源抗體輕鏈表達質粒，在所述人源抗體重鏈表達質粒含有重鏈可變區同源臂重組序列，所述人源抗體重鏈編碼基因通過自身攜帶的，并與重鏈可變區同源臂重組序列相同的同源臂重組序列通過同源重組整合到所述人源抗體重鏈表達質粒中，以及，在所述人源抗體輕鏈表達質粒含有輕鏈可變區同源臂重組序列，所述人源抗體輕鏈編碼基因通過自身攜帶的，并與輕鏈可變區同源臂重組序列相同的同源臂重組序列通過同源重組整合到所述人源抗體輕鏈表達質粒中。本發明提供的人源抗體表達質粒系統用于人源抗體制備具有制備省時、高效、正確率高的優點。

技術領域

本發明公開了一種質粒，屬于核酸分子技術領域。

背景技術

抗體（antibody，Ab）是介導體液免疫的重要效應分子，是B細胞接受抗原刺激后增值分化為漿細胞后所產生的糖蛋白，主要存在于血清等體液中，能與相應抗原特異性結合，進而來發揮免疫功能，適應癥覆蓋自身免疫性疾病、實體瘤和血液腫瘤等領域。

單克隆抗體藥物具有以下趨勢：（1）抗體治療領域得到極大擴展，從傳染病到腫瘤（淋巴瘤、胃癌、肺癌等）、自身免疫疾病（銀屑病、系統性紅斑狼瘡等）、代謝性疾病（高脂血癥等）或者退行性病變（黃斑變性、阿爾茲海默癥）。（2）整個研發生產銷售鏈條非常完善，從基因發現，抗體上游（載體構建、克隆表達）到下游（規模化發酵和純化質量控制、雜質去除）以及產業化（生產、全球銷售、部分產品進入醫保）。（3）新技術層出不窮，從單克隆抗體技術到雙特異抗體、多特異抗體，抗體藥物偶聯物，納米抗體多種抗體藥物發展。（4）給藥方式多樣：從經典的靜脈和腹腔給藥到皮下注射，眼內注射，鼻腔吸入等。

抗傳染病抗體藥物伴隨抗體藥物的發展而進入高速發展期，從呼吸道合胞病毒治療性抗體到炭疽治療性抗體藥物，再到最近的埃博拉抗體治療藥物和COVID-19治療性抗體藥物。從某種程度上講，抗體藥物因為靶標明確，作用機理相對清晰，成為各大制藥公司的戰略布局方向。COVID-19治療性抗體藥物研發中，再生元、禮來、阿斯利康、Vir等制藥巨頭研發進度居領先地位。

傳染病抗體藥物的發現從雜交瘤技術，到噬菌體文庫技術，到轉基因鼠技術再到現在的單細胞PCR技術、單細胞測序技術。相比以前的發現技術，單細胞技術具有明顯技術進步，基因來源于康復者或者免疫志愿者的外周血單個B淋巴細胞，為天然配對的全人源抗體基因，基本避免以前抗體研發的免疫原性和穩定性不足的缺陷。

無論哪種發現策略，最后需要將輕鏈和重鏈的全長基因克隆到真核表達載體上，制備全分子的抗體，然后進行體內、外活性評價，才能進一步評估是否具有成藥性。目前，相對優選的策略是來源于外周血的全分子抗體候選分子直接進行篩選和評價。常規的方法是構建線性表達框的策略進行結合活性篩選，缺點是表達量少，常常存在突變，有時序列不唯一。篩選獲得具有結合活性的抗體基因后，需要將抗體基因克隆到T載體上進行測序確認后，再通過酶切亞克隆到表達載體。有的商品化載體可以同時實現克隆和表達載體構建，缺點是存在個別位點的氨基酸突變，這樣使得藥物研發中還得進行氨基酸的校正突變，增加了復雜性。

發明內容

本發明的目的是提供一種可以便捷、快速構建人源IgG1/kappa、IgG1/Lambda抗體表達載體的方法，可以將抗體輕重鏈的可變區基因通過同源重組的方式快速地克隆至包含有信號肽和編碼抗體恒定區基因的質粒中，即可進行抗體的真核表達。

基于上述目的，本發明首先提供了一種人源抗體表達質粒系統，所述人源抗體表達質粒系統包括人源抗體重鏈表達質粒和人源抗體輕鏈表達質粒，在所述人源抗體重鏈表達質粒含有重鏈可變區同源臂重組序列，所述人源抗體重鏈編碼基因通過自身攜帶的，并與重鏈可變區同源臂重組序列相同的同源臂重組序列通過同源重組整合到所述人源抗體重鏈表達質粒中，以及，在所述人源抗體輕鏈表達質粒含有輕鏈可變區同源臂重組序列，所述人源抗體輕鏈編碼基因通過自身攜帶的，并與輕鏈可變區同源臂重組序列相同的同源臂重組序列通過同源重組整合到所述人源抗體輕鏈表達質粒中。