[發明專利]一種線粒體全基因組測序的引物集及高通量測序的方法

有效

• 申請號: 202210335789.0
• 申請日: 2022-03-31
• 公開（公告）號: CN114480578B
• 公開（公告）日: 2023-08-18
• 發明（設計）人: 余紀尖;辛波波;伍先橋
• 申請（專利權）人: 生工生物工程（上海）股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6806
• 分類號: C12Q1/6806;C12Q1/6869;C12N15/11
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 宋南

1.一種線粒體全基因組測序的引物集，其特征在于，其包括如SEQ?ID?NO.1-102所示的第一引物子集和如SEQ?ID?NO.103-202所示的第二引物子集，所述第一引物子集包括多個子集，所述第二引物子集包括多個子集，且在同一引物子集內的任意兩個引物對的擴增產物互不重疊。

2.根據權利要求1所述的引物集，其特征在于，所述第一引物子集包括1個、2個、3個或4個子集；所述第二引物子集包括1個、2個、3個或4個子集。

3.根據權利要求2所述的引物集，其特征在于，用某一引物子集產生的任一個擴增產物與其他引物子集的一個或多個擴增產物存在重疊區。

4.一種PCR擴增體系，其特征在于，其包括權利要求1-3任一項所述的引物集。

5.根據權利要求4所述的PCR擴增體系，其特征在于，所述PCR擴增體系還包括緩沖體系，所述引物集位于所述緩沖體系中。

6.一種試劑盒，其特征在于，其包括權利要求1-3任一項所述的引物集。

7.根據權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中的引物集包括如SEQ?IDNO.1-102所示的第一引物子集和如SEQ?ID?NO.103-202所示的第二引物子集，

第一引物子集中SEQ?ID?NO.1-100所示的引物的濃度為10uM，SEQ?ID?NO.101-102所示的引物的濃度為20uM，第二引物子集中SEQ?ID?NO.103-104所示的引物的濃度為20uM，SEQID?NO.105-200所示的引物的濃度為10uM，SEQ?ID?NO.201-202所示的引物的濃度為20uM。

8.如權利要求1-3任一項所述的引物集、權利要求4-5任一項所述的PCR擴增體系或權利要求6-7任一項所述的試劑盒在人線粒體全基因組高通量測序中的應用。

9.一種人線粒體全基因組高通量測序的方法，其特征在于，所述方法包括步驟：

利用權利要求1-3任一項所述的引物集，對待測的基因組DNA樣品進行PCR擴增，從而獲得不同引物子集的擴增產物的混合物，進行測序分析，且所述的方法是非疾病的診斷和非疾病的治療性方法；第一引物子集中SEQ?ID?NO.1-100所示的引物的濃度為10uM，SEQ?IDNO.101-102所示的引物的濃度為20uM，第二引物子集中SEQ?ID?NO.103-104所示的引物的濃度為20uM，SEQ?ID?NO.105-200所示的引物的濃度為10uM，SEQ?ID?NO.201-202所示的引物的濃度為20uM。

10.根據權利要求9所述的人線粒體全基因組高通量測序的方法，其特征在于，將不同引物子集的擴增產物進行等摩爾量混合，經過第二輪擴增加上接頭、index序列后上機測序分析。