[發明專利]一種高效分離純化NKT細胞的免疫學方法

在審

• 申請號: 202210317128.5
• 申請日: 2022-03-28
• 公開（公告）號: CN114561353A
• 公開（公告）日: 2022-05-31
• 發明（設計）人: 鄒瑤;王婷婷;于超
• 申請（專利權）人: 重慶醫科大學
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783;G01N33/569
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種高效分離純化NKT免疫學細胞的方法，包括步驟：

(1)T細胞的分離純化；

(2)NKT細胞的分離純化；

(3)NKT細胞的鑒定；

(4)分選中脾臟細胞數目的選擇。

2.根據權利要求1所述的方法，T細胞的分離純化具體步驟：在室溫下，經大鼠血清、EasySep^TMMouse T Cell Isolation Cocktail、EasySep^TMDextran RapidSpheres^TM處理，再放入磁鐵中孵育，傾倒所得的液體即為T細胞懸液。

3.根據權利要求1所述的方法，NKT細胞的分離純化具體步驟：在室溫下，將上述得到的T細胞懸液，經EasySep^TMMouse NK Cell Isolation Cocktail、EasySep^TMDextranRapidSpheres^TM處理，再放入磁鐵孵育，傾倒所得的液體即為NKT細胞懸液；再次加入培養基重懸，放入磁鐵孵育，傾倒所得的液體即為NKT細胞懸液；將兩次液體合并，即為分離純化后的NKT細胞懸液。

4.根據權利要求1所述的方法，對所得的NKT細胞進行流式染色鑒定，高表達CD3與NK1.1，且純度高達95％。

5.根據權利要求1所述的方法，分選中脾臟細胞數目的選擇具體步驟：選用不同數目的脾臟細胞按照2的方法進行分選，當脾臟細胞數≥10⁸cells時，由圖中可以看出從小鼠脾臟細胞中分離出的細胞存在分群不明顯的現象，且NKT細胞純度低；當脾臟細胞數≤5x10⁷cells，由圖中可以看出從小鼠脾臟細胞中分離的細胞分群明顯、細胞活率大，且NKT細胞純度高，達95％。